原代细胞HEPES缓冲液的使用方法及配制

原代细胞HEPES缓冲液的使用方法及配制

(1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中，再过滤除菌。每1000ml培养液中加入2.38克HEPES，待溶后用lN NaOH 调pH至7.2，滤过除菌后使用。原代细胞此时HEPES的使用浓度为10 mmol/L。

(2)亦可配成 100 x 贮存液(l mol/L)，使用前取 99ml培养液加入 lml贮存液，zui终应用浓度仍为10mmol/L。l mol/L(100 x)HEPES贮存液配制方法：取23.8g HEPES溶于90ml双蒸水中，用lN NaOH调pH至7.5一8.0，然后用水定容至100ml，过滤除菌，分装小瓶(2ml/瓶)，4℃或-20℃保存。

需要注意的是，HEPES缓冲液的使用终浓度为10-50mmol/L，对原代细胞无毒性作用。一般情况下，浓度为20mmol/L的HEPES即可达到缓冲能力。

一、加少量盐的HEPES Buffer配方(500ml)

HEPES 6.5g、NaCl 8.0g、Na2HPO4.7H2O 0.198g、用0.5M NaOH 水溶液调节pH值，zui后定容。

二、500ml 1 M HEPES, pH = 7.0 Stock solution的配制

119.15 g HEPES 溶解在400ml蒸馏水中，加0.5~1M 的NaOH水溶液调节至少所需pH(HEPES的有效pH 范围是6.8~8.2)，然后用蒸馏水定容至500ml，于4摄氏度保存。

三、2×HEPES缓冲盐溶液的配制

将1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027g Na2HPO4.2H2O、0.2g葡聚糖(glucan or dextran)和1g HEPES溶解在90ml的蒸馏水，原代细胞用0.5M NaOH调节至所需pH值，再用蒸馏水定容至100ml即可。