杂交瘤细胞技术分析

杂交瘤细胞技术分析

克隆化的细胞可以在体外进行大量培养，收集上清液而获得大量的单一的克隆化抗体。不过体外培养法得到的单克隆抗体有限，其不能超过特定的细胞浓度，且每天要换培养液。而体内杂交瘤细胞繁殖可以克服这些限制。杂交瘤细胞具有从亲代淋巴细胞得来的肿瘤细胞的遗传特性。如接种到组织相容性的同系小鼠或不能排斥杂交瘤的小鼠（无胸腺的裸鼠），杂交瘤细胞就开始无限地繁殖，直至宿主死亡。产生肿瘤细胞的小鼠腹水和血清中含有大量的杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体，这种抗体的效价往往高于培养细胞上清液的100~1000倍。

利用免疫抑制剂，如降植烷、液体石蜡、抗淋巴细胞血清等，可以加速和促进肿瘤的生长。

1．材料 （1）经高压灭菌的降植烷。

（2）Balb/c鼠：5~8周龄。

（3）杂交肿瘤细胞：取对数生长期的细胞。

（4）RPMI—1640培养液

（5）新生牛血清

2．操作方法

(1)于小鼠腹腔注射0.5ml降植烷，注射后1～9周内种植细胞。

(2)收取对数生长期的杂交瘤细胞，用5%FCS—1640液洗涤一次，1000r/min离心10min。

(3)取样，用台盼兰染色，计活细胞数，重新用5%FCS—1640液配成1.0×107细胞/ml的悬液。

(4)给注射了降植烷的小白鼠接种杂交肿瘤细胞，每只腹腔注射1ml（含1.0×107个细胞/ml）。

(5)接种后10天左右时间肿瘤体积zui大，此时可由腹腔抽取腹水，每隔1~3天取1次，可取10次。血清可由腋下动脉或心脏采血后分离。