培养原代细胞时哪些问题需要注意

培养原代细胞时哪些问题需要注意

1.原代细胞用1640加10%胎牛血清，有的种系用DMEM.血清要求质量较高，在普通血清中细胞生长不太好。1640用双蒸水溶解，按说明加入碳酸氢钠。

2.培养液中应加入HEPES，起缓冲pH值的作用，否则会影响细胞状态。如果用20%的HEPES，每次配培养液时每200ml培养液可加入5ml.加入HEPES后1640培养液颜色略呈橘黄色而非暗红色。

3.消化所用胰酶可选择0.125%浓度，且不要消化时间太长。也有研究者认为不用胰酶，直接吹打使细胞脱壁，但使用胰酶效果较好。消化时在镜下观察到原代细胞形态稍有变化即可，不要等形态明显变化后再停止。可以不用加血清终止消化，只要将胰酶倒出来，加上培养液吹打即可。

4.传代密度不宜过高也不易过低，一般1瓶传3瓶可能比较合适。

5.培养液应该适当偏酸性，在7.0-7.2之间比较好。一般加上HEPES后，pH值是不用调的。

6.细胞代数越高生长越快，同时性状和原代差别也更大。一般2-3天传代一次比较合适。

7.传代时原代细胞密度在80%左右比较好，如果超过90%融合再传会影响细胞状态。