影响哺乳动物细胞复苏的因素

影响哺乳动物原代细胞复苏的因素包括：（a）细胞类型，（b）生长阶段，（c）细胞处于细胞周期的哪个阶段，（d）终悬液中的细胞数量和浓度。可通过优化以上因素来提高复苏细胞活力， 另外，还需考虑冻存保护剂的特性以及冻存过程的具体操作。
哺乳动物细胞培养对其他细胞和微生物的污染特别敏感，例如 Hela 细胞。由于这种特性，初始细胞系可通过同工酶分析、染色体组型分析、免疫分析或基因组分析，检测来源。冻存前后均应该进行如上检测。特别需要注意的是，病毒和支原体污染。 一套完整健全的哺乳动物细胞系鉴定程序应该包括，检查是否存在细菌、真菌、病毒、支原体、甚至原生生物原代细胞的污染。

哺乳动物细胞准备冻存时，需要将细胞调整到合适生长状态， 确保既能得到足够的复苏细胞又无大量非必需生长的细胞。对大部分哺乳动物细胞来说，*起始细胞数为 106-107/ml 左右。为方便加入等体积的冻存保护剂（2× 冻存保护剂 + 培养基），细胞悬液浓度应以起始浓度的两倍准备。或者，也可将沉淀细胞重悬在冻存 保护剂（1× 冻存保护剂 + 培养基）中达到预期细胞数。细胞操作应该温和小心，确保原代细胞在冻存前是健康的。尽量避免剧烈吹打及 高速离心。适当情况下，可注入 5% 或 10% CO2 来调节 pH。