兔食管上皮细胞培养步骤

原代细胞实验材料：
      1. 大兔的正常食管组织
      2. 6孔培养板：用多聚赖氨酸4℃包被过夜
      3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4
      4. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊
 
      实验方法：
      1. 处死大兔，取正常食管组织放入含双抗的PBS（pH=7.2）中反复清洗3次，以洗去组织表面的血丝及粘液；
      2. 小心的用眼科剪镊将食管黏膜与黏膜下组织分离；
      3. 分离出的粘膜组织用含双抗的PBS（pH=7.2）反复冲洗若干次；
      4. 将清洗后食管黏膜组织剪成1mm3 左右大小的组织块；
      5. 再次用含双抗的PBS（pH=7.2）反复清洗，直至清洗液清亮为止；
      6. 将黏膜组织块按1块/cm2 的密度接种于6孔培养板中，上皮面朝下；
      7. 将贴满组织块的培养板室温放置5~10分钟，待组织块贴壁后，转入37℃、5%CO2 的培养箱中静置培养。
      8. 静置2h左右，待组织块基本不会浮起后，加入0.5-1ml培养液，置于37℃、5%CO2 的培养箱中继续培养。3-4天后有上皮原代细胞从组织边缘爬出，7天左右铺满板面。
人高敏三碘甲状腺原氨酸(u-T3)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Ultrasensitivity Tri-iodothyronine，u-T3 ELISA Kit                    
人黄体生成素释放激素(LHRH)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Luteinizing Hormone-Releasing Hormone，LHRH ELISA Kit                     
人8异前列腺素(8-iso-PG)ELISA试剂盒    进口/分装    Human 8-iso prostaglandin，8-iso-PG ELISA Kit                    
人肾素(Renin)ELISA试剂盒     进口/分装    Human Renin ELISA Kit                    
人肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Epinephrine/Adrenaline，EPI ELISA Kit                    
人雌二醇受体(ER)ELISA试剂盒    进口/分装    Human Estradiol receptor，ER ELISA Kit 
原代细胞