细胞系诱导分化的心肌细胞

细胞系在一定环境下可自发分化为自发节律收缩的心肌细胞, zui常用的方法为悬滴培养聚合形成拟胚体法。从结构形态上看, 人胚胎干细胞诱导分化的心肌细胞(human embryonic stem cells derived cardiomyocytes, hESC-CM)早期阶段(诱导后 20~40 d), 在相差显微镜下观察细胞呈圆形、较小 (直径131±32 μm、面积480±32 μm2 , P<0.001), 缺乏可识别的心肌细胞结构, 与胎儿心肌细胞表型相似, 肌纤维含量低、非聚合、随机分布、不规则。

随着心肌细胞的逐渐成熟, 中期阶段(诱导后40~80 d), 肌小节结构逐步完善, 心肌细胞的收缩机制变得更有组织性, 细胞形态更趋向于成人形态。晚期阶段 (诱导后80~120 d), 心肌细胞的形态逐渐成熟(直径 284±15 μm、面积1 716±150 μm2 , P<0.001), 多核心肌细胞的比例是35.3%(成人心肌细胞中多核心肌细胞的比例是25%~57%), 且分化为心房、心室、起搏传导细胞等终末细胞。从分子水平看, 人胚胎干细胞向心肌细胞分化的过程中, 多能性基因Oct-4、 NANOG、SSEA和Sox2的表达迅速下降, 中胚层标志Tbra、Mesp1及Mesp2的表达瞬时上升, 到拟胚体发育的第12 d, 心脏特异性标志物ANF、α-MHC、 MLC-2a及Tropomyosin开始表达, 并且随着分化时间的延长表达量逐渐升高。从电生理方面来看, 随着培养时间的延长离子通道逐渐成熟。早期阶段心肌细胞可观察到原始节律动作电位, 如L-Ca2+通道和瞬间K+ 外流通道; 中期阶段心肌细胞表达K+ 电流、 Na+ 电流及起搏电流。

动作电位上升支主要由Na+ 内流形成, 在发育过程中随着心肌细胞Na+ 通道密度增加, 动作电位上升支的上升速度由胎儿期8 V/s增加到成人期的150~350 V/s, hESC-CM动作电位上升支的速度在4~118 V/s范围内。hESC-CM收缩、舒张过程中均伴随着Ca2+瞬变,对早期阶段和晚期阶段hESC-CM Ca2+瞬变进行比较可知,Ca2+瞬变振幅峰值在早期阶段和晚期阶段基本没有发生变化(0.22±0.02 vs 0.24±0.02 F/F0,P=0.47);细胞系在晚期阶段zui大的上升速度和衰减速度明显提高, Ca2+ 瞬变的达峰时间明显缩短(342±2 ms vs 102±1 ms, P<0.0001); Ca2+瞬变中Ca2+ 的再摄取随着hESC-CM培养时间的延长也在不断地发生变化, 晚期阶段hESC-CM具有更快的Ca2+ 瞬变动力学(T50%舒张期 446±3 ms vs 227±2 ms, P<0.001)。使用不同的细胞株可能会产生一定的差异, 这与不同的细胞培养、分化方法有关, 进一步强化了制定标准细胞培养、分化方法的必要性。
Hydroxythiohomo ...    CDGG-031626-03    1mg    苯氟磺胺(抑菌灵)    CDDM-H963150-1mg    100mg/L;1ml
Itopride-d6 Hydr...    CDGG-031629-02    1mg    腐霉利    CDDM-I931502-1mg    1000mg/L;1ml
L-(-)木糖(无证书)    CDGG-010408-06    1g    蔗糖 标准品    CDCP-CARB-23-1g    25ml
L-(+)-谷氨suan    CDCP-O-807-10g    1g    异佛尔酮    CDCP-AA-9-1g    10g
L-(+)-抗坏血suan，维生素C，...    CDGK-SPEI-140    100g    土壤-总石油碳氢化合物(TPH)...    CFEQ-4-120019-0100    2份平行
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