原代细胞判断之形态学观察法

原代细胞成活率，判断之形态学观察法：

1、细胞内出现颗粒或空泡。

2、细胞内如果出现颗粒物质，表明细胞处于非健康状态。

3、同样，细胞内出现空泡也说明细胞处于非健康状态。

 细胞丧失双折射性：

    如果发生在单层细胞：一个具有双折射性的正常细胞逐步失去这一特征（相差显微镜下细胞边缘成晕环），则提示该细胞已经死亡，即zui终干枯死亡。

    如果发生在悬浮细胞：正常悬浮细胞清晰透明，如胞内出现颗粒或变浑浊表明细胞受损，甚至死亡。

    怎样去除死细胞？单层培养的细胞死亡后，一般会漂浮起来，因此不需要特殊处理。

而悬浮细胞或原代培养细胞则要通过密度离心（如Ficoll梯度）方法收集死细胞。

细胞成活率检测实验

即刻检测实验——

染料柜染实验：原理——萘黑、台盼蓝以及很多其他染料均不能透过活细胞。概要——将细胞悬液与染料混匀，在低倍显微镜下检查。材料包括无菌材料,即细胞；生长液；0.25%胰酶；PBSA.非灭菌材料即：血细胞计数板；生存力染料；巴斯德吸管；显微镜；手执计数器。

操作步骤：

1、用胰蛋白酶消化或离心，重悬制备高深度的细胞悬液

2、取一块干净的血细胞计数板，将盖玻片固定在适当位置上。

3、将一<滴细胞悬液和一滴（台盼蓝）或四滴（萘黑）染料混匀/li>

4、加至血细胞计数板的计数室中。

5、静置1~2min（但不要放置很久，否则活细胞会受到损伤而吸收染料）。

6、将计数板置于显微镜下，用10倍物境找到计数网格。

7、计数细胞总及着色细胞的数目。

8、清洗血细胞计数板，放入盒内。

  原代细胞实验分析-计算未着色细胞的百分数，该数字即为本方法所得出的细胞生存力百分数。据统计，原代培养细胞成活率一般为50%~90%。细胞系一般为90%~100%存活。冻融细胞一般为50%~80%存。
曲氟胸苷相关物质A标准品        20mg    14599-46-3 
曲康唑标准品    Terconazole    200mg    67915-31-5 
曲米帕明标准品        25mg    315-69-5 
曲司氯铵标准品    Trospium Chloride     100mg    10405-02-4 
曲司氯铵相关物质A标准品        20mg    76-93-7 
曲沃前列素标准品        3ml    
曲沃前列素杂质标准品        1．5ml    
去甲替林盐酸盐标准品    Nortriptyline Hydrochloride    200mg    894-71-3 
去甲西泮标准品    Nordazepam CIV    50mg    1088-11-5 
去羟米松标准品    Desoximetasone    200mg    382-67-2
去氢胆酸标准品    Dehydrocholic Acid    200mg    81-23-2
去氢孕酮标准品    Dydrogesterone    200mg    152-62-5
原代细胞