罗湖病毒（TiLV）RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

罗湖病毒（TiLV）RNA核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）使用方法:

一、样品 RNA 的制备

1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意：可以选用本公司的一管式病毒 RNAout

2、或柱式病毒 RNAout。

二：RT（逆转录）反应合成 cDNA

1. 按下表配制 RT 反应体系（20 μL 体系）

2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。

3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆转录酶（含 RI），

反应终体积为 20μL。

4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。

5. 70℃保温 10 分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用，丌需要纯化。

实验步骤包括RNA提取、反转录、PCR和琼脂糖凝胶电泳，以软件分析电泳条带的灰度值（IOD值），通过与内参基因的灰度值比较，判断目的mRNA的相对表达量。