Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用方法

Bradford蛋白浓度测定试剂盒使用方法:

        1、 取1ml蛋白标准配置液加入到25mgBSA的蛋白标准管中，*溶解蛋白标准品，即为25mg/ml的蛋白标准溶液。配制成的蛋白标准溶液                可-20℃长期保存。

        2、 取适量25mg/ml蛋白标准溶液，稀释至终浓度为0.5mg/ml。标准品与蛋白样品用同样的溶液稀释。但为了简便起见，通常使用                0.9%NaCl或PBS稀释标准品。

        3、 做标准曲线。将标准品按0，1，2，4，8，12，16，20ul加到96孔板中，不足20ul的加标准品稀释液补足到20ul。

        4、 将待测的蛋白样品稀释至合适浓度，加到96孔板中，使待测样品总体积也为20ul。

        5、 每孔加入考马斯亮蓝G250溶液200ul，充分混匀（可将酶标板放在振荡器上振荡30s），室温放置3-5min后，以标准曲线0号做参比，在                 595nm波长下比色测定，记录各孔吸光度值。以标准品蛋白含量（ug）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

        6、 如用分光光度计测定，请在第三步的时候将标准品体积改为1ml，浓度梯度用生理盐水稀释为0，1，2，5，10，15，30ug/ml。或根据样                品调整浓度梯度。

        7、 将样品稀释至合适浓度，加到小试管中，使待测样品总体积也为1ml。

        8、 每只试管加考马斯亮蓝G250溶液3ml，充分混匀，室温放置3-5min后，以标准曲线0号做参比，在 595nm波长下比色测定，记录各孔吸光度值。