人D二聚体ELISA检测试剂盒操作步骤

人D二聚体ELISA检测试剂盒操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。

大鼠肝细胞；IAR20

大鼠气管上皮细胞；RTE

大鼠肝细胞瘤；H-4-II-E

大鼠肝细胞瘤；H4-II-E-C3

大鼠骨骼肌成肌细胞；L6

正常大鼠肾细胞；NRK

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-1

大鼠胚胎心肌细胞；H9c2(2-1)

大鼠骨髓瘤细胞；IR983F

Walker氏癌肉瘤256瘤株；W256

大鼠肾小球系膜细胞；HBZY-1

大鼠胰岛细胞瘤细胞；INS-1

大鼠胰岛β细胞瘤细胞；RIN-m5F

正常大鼠肾细胞；NRK

正常大鼠肾细胞（EGF受体阳性）；NRK49F

大鼠肾系膜细胞；RMC

大鼠脑胶质瘤细胞；C6

大鼠肝细胞；BRL

正常大鼠肾细胞；NRK

大鼠肝细胞；BRL 3A

大鼠骨骼肌成肌细胞；L6

大鼠胚胎心肌细胞；H9c2(2-1)

大鼠雪旺细胞；RSC96

大鼠胸大动脉平滑肌细胞；A7r5

正常大鼠肾细胞；NRK-52E

大鼠肺泡巨噬细胞；NR8383[AgC11x3A; NR8383.1]

大鼠肝细胞；BRL 3A

大鼠脑胶质瘤细胞；C6

大鼠肝癌细胞；CBRH-7919 [CBRH7919]

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞；PC-12 [PC12]

大鼠肝癌细胞；RH-35

大鼠乳腺癌细胞；SHZ-88

大鼠胰腺外分泌腺肿瘤细胞；AR42J

大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞；RBL-2H3

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化)；PC-12(低分化)

大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(高分化)；PC-12(高分化)

大鼠骨髓瘤细胞；Y3-Ag 1.2.3