鼠抗人卵巢癌抗原单克隆抗体操作步骤

鼠抗人卵巢癌抗原单克隆抗体操作步骤:

1 . 切片常规脱蜡至水。如需抗原修复,可在此步后进行

⒉ 缓冲液洗  3min/2  次。

⒊ 为了降低内源性过氧化物酶造成的非特异性背景染色,将切片放在  Hydrogen Peroxide Block  中孵育  10-15  分钟。

⒋ 缓冲液洗  5min/2  次。

⒌ 滴加  Ultra V Block  , 在室温下孵育  5  分钟以封闭非特异性的背景染色。

(注:孵育不要超过  10  分钟,否则会导致特异性染色降低。如果一抗的稀释液中含有  5  -  10%  正常羊血清,这一步可以省略。)

⒍ 缓冲液洗  5min/2  次。

⒎ 滴加一抗工作液  37  ℃孵育  1  -  2  小时。(具体孵育时间和温度由试验者最终决定)

⒏ 缓冲液洗  5min/2  次。

9  . 滴加  Primary Antibody Enhancer (增强子),在室温下孵育  20  分钟。

10  .缓冲液洗  5min/2  次。

11  .滴加  HRP Polymer (酶标二抗) ,在室温下孵育  30  分钟。

(注: HRP Polymer  对光敏感,应避免不必要的光暴露并储存在不透明的小瓶中。)

12  .缓冲液洗  5min/2  次。

13  .向  1ml DAB Plus Substrate  (或  AEC Plus Substrate)  中滴加  1-2  滴  DAB Plus Chromogen  (或  AEC Plus Chromogen ),混匀后滴加到切片上,孵育  3  -  15  分钟。(具体时间由染色深浅决定。)

14  .自来水充分冲洗,复染 ,脱水,透明,封片。

A875(人黑色素瘤细胞)

AM(人腺样囊性癌细胞（高转移）)

BC-009(人乳腺癌细胞)

BC-019(人乳腺癌细胞)

BC-020(人乳腺癌细胞)

BC-021(人乳腺癌细胞)

BC-022(人乳腺癌细胞)

BE(2)-M17(人神经母细胞瘤细胞)

BGC-803(人胃癌细胞)

C918(人眼脉络黑色素瘤细胞)

CAL-27(人舌鳞癌细胞)

LS 180(人结肠腺癌细胞)

CNE-2Z(人鼻咽癌细胞)

COLO 201(人结直肠腺癌细胞)

CW-2(人结肠癌细胞)

CRT(人神经胶质瘤细胞)

D283 Med(人脑髓母细胞瘤细胞)

EA.hy926(人脐静脉细胞融合细胞)

ECV-304(人脐静脉内皮细胞)

EJ(人膀胱癌细胞)

H-97(人高转移肝癌细胞)

HCC94(人子宫鳞癌细胞（高分化）)

HCCLM3(人高转移肝癌细胞)