人Ⅱ型肺泡上皮细胞永生化细胞专用培养基步骤

人Ⅱ型肺泡上皮细胞永生化细胞专用培养基步骤：

细胞复苏‌：

从液氮罐中取出冻存细胞，迅速放入37℃水浴中解冻。

解冻后，将细胞转移到含有新鲜培养基的培养皿中，轻轻摇动使细胞均匀分布。

放入37℃、5%CO2的培养箱中培养。

‌细胞换液‌：

吸除或倒掉培养皿内的旧培养液。

加入PBS缓冲液，轻轻漂洗细胞，以去除悬浮在细胞表面的碎片，重复几次。

加入新的培养基。

‌细胞传代‌：

当细胞长到80%~90%时，进行传代。

吸除或倒掉瓶内旧培养液，加入PBS缓冲液漂洗。

加入消化液，轻轻摇动使消化液流遍所有细胞表面。

将培养瓶放入37℃培养箱中静止几分钟，观察细胞变化。当细胞间隙增大后，加入含有血清的培养液终止消化。

吹打细胞使其成为悬液，转移到离心管中离心。

弃上清，加入适量的细胞培养液重悬细胞。

按比例分装到新的培养皿中，补加新鲜培养基。

做好标记，放入37℃、5%CO2的培养箱中培养。

‌细胞冻存‌：

选择对数生长期的细胞进行冻存。

将细胞转移到离心管中离心，弃上清。

加入适量的冻存液（如90%的培养基+10%的DMSO），轻轻吹打重悬细胞。

将细胞转移到冷冻保存管中，标记后放入程序降温盒，再放入-80℃冰箱冻存。几小时后或过夜转至液氮罐保存。