BEL-7402人肝癌细胞的实验操作中注意事项

    在BEL-7402人肝癌细胞的实验操作中，除了常规的无菌操作和细胞培养规范外，还需特别注意以下几点：

首先，细胞传代时的消化时间需严格控制。该细胞系对胰酶较为敏感，过度消化会导致细胞膜损伤，影响后续贴壁和增殖。建议在显微镜下观察细胞回缩变圆后立即终止消化，轻柔吹打时避免产生气泡。若出现聚团现象，可采用400目细胞筛过滤以获得单细胞悬液。

    其次，冻存复苏环节要格外谨慎。冻存液中的DMSO浓度建议控制在8%-10%，程序降温盒必须预冷至4℃后再放入-80℃冰箱。复苏时需快速水浴震荡至最后一块冰晶融化，立即加入预温的培养基进行梯度稀释，以降低DMSO的渗透压冲击。值得注意的是，该细胞系复苏后通常需要48小时才能恢复增殖活性，不宜在24小时内进行后续实验。

    对于药物敏感性实验，要特别注意细胞接种密度的优化。预实验表明，BEL-7402在96孔板中的最适接种密度为5×10³~8×10³ cells/well，密度过高会导致对照组提前进入平台期。建议在加药前用无酚红培养基置换原培养基，避免药物与酚红发生相互作用干扰检测结果。MTT法测定时，甲臜结晶溶解后需在1小时内完成检测，该细胞系产生的甲臜结晶在常规DMSO溶解后呈现特征性的紫红色，若出现异常颜色变化应重新实验。