原代细胞实验中淋巴细胞转化的实验

原代细胞实验中正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中受到特异性抗原或有丝分裂原刺激。可转化为淋巴母细胞。细胞免疫缺陷时，患恶性肿瘤或某些其他疾病时。转化率显然降低。目前zui常用植物血凝素（PHA）作为分裂原来检测受试者的淋巴细胞转化率，从而判定其细胞免疫功能，称为PHA刺激淋巴细胞实验的转化实验。
实验材料       
肝素
试剂、试剂盒    
199培养液小牛血清链霉素青霉素PHA
仪器、耗材    
注射器针头试管吸管离心机
实验步骤       
1.  采肝素抗凝血1~2毫升（1毫升血中加肝素20单位）充分混匀。37℃静置1~2小时。红细胞沉淀后，吸取血浆层并捎带些红细胞。移入另一无菌试管中。计算白细胞数然后2000 rpm 离心10分钟。弃上清液。用199培养液将沉淀的白细胞配成1×107/毫升细胞悬液。
2.  取细胞悬液0.6毫升（6×106细胞）加入含有2.4毫升199培养液的培养瓶中。
3.  按每毫升营养液加30 ug PHA加入PHA。
4.  37℃孵育68~72小时。培养过程中，每天翻动培养瓶1~2次。
5.  培养后。振荡培养瓶。将细胞重新悬起，然后移入试管中。
6.  1000 rpm 离心5分钟。
7.  尽量弃去上清液，将沉淀物混匀，取一滴放在载玻片上，推成血膜（头、体、尾分明）干燥，用瑞特氏染液染色）镜检。
8.  原代细胞实验中计算淋巴细胞的转化率：油镜下观察每张玻片的头、体、尾三段。每段各一纵列（目的是减少推片中细胞分布不均的误差）。
9.  每张玻片记数200~400个细胞，计算转化率其中头部50~100，体部50~100，尾部100~200细胞。 一般认为转化率的正常值为60~70%
Acetaminophen    对乙酰氨基酚标准品    103-90-2    400mg
8-Bromotheophylline    8-溴茶碱标准品    10381-75-6    400mg
    ALPHA-乳白蛋白标准品        400mg
    氟化牙粉：单氟磷酸钠/磷酸氢钙标准品        4.6oz
    氟化牙粉：单氟磷酸钠-碳酸钙标准品        4.6oz
    氟化牙粉：氟化钠/二氧化硅标准品        4.5oz
Methyl Alcohol     甲醇标准品    67-56-1     3x1.5ml
Diethanolamine    二乙醇胺标准品    111-42-2    3ml
    三乙醇胺标准品    102-71-6     3ml
    帕立骨化醇溶液标准品        3ml
    曲沃前列素标准品        3ml
Potassium Bitartrate (AS)    酒石酸氢钾标准品    868-14-4     3g
原代细胞