原代细胞融合实验步骤

实验方法原理    原代细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)和电脉冲。目前应用zui广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。PEG的促融机制尚不*清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极性基团发生结构重排。
实验材料    
鸡红细胞
试剂、试剂盒    
PEGHanks液
仪器、耗材    
显微镜离心机水浴箱离心管试管载玻璃片盖玻片
实验步骤    1.  取新鲜鸡血以0.85%生理盐水制成10%的悬液。

2.  称取0.5克PEG（MW=4 000）放入试管内，在酒精灯上融化之，迅速加入0.5 ml 预热的Hanks液混匀制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。

3.  取上述10%的鸡红细胞悬液1 ml 放入离心管中，再加入5 ml Hanks液混匀，然后以1 000 rpm 离心5分钟，小心弃去上清，用指弹法将细胞团块弹散。

4.  取上述50%PEG溶液0.5 ml，在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液，边加边轻轻摇动混匀。待PEG全部加入后静置1分钟左右。此全部过程都要求在37℃水浴内进行。

5.  缓慢滴加9 ml Hanks液以终止PEG的作用，在37℃水浴内静置5分钟。

6.  离心弃上清后，取一滴融合后的细胞悬液滴片，加盖片镜检。

7.  结果观察：在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个异核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。

8.  融合率的计算：在高倍镜下随机计数200个细胞（包括融合的与未融合的细胞），以融合原代细胞（含两个或两个以上的细胞核的细胞）的细胞核数除以总细胞核数（包括融合与未融合的细胞核）即得出融合率。
Terconazole    200mg    曲康唑标准品    67915-31-5 
Terfenadine    200mg    特非那定标准品    50679-08-8 
Terfenadine Related Compound A    100mg    特非那定相关物质A标准品    76815-60-6 
Terfenadine Related Compound B    50mg    特非那定相关物质B标准品    
Terpin Hydrate    750mg    萜品标准品    2451/1/6
tert-Butylmethyl ether    1.2ml×3ampules    甲基叔丁基醚标准品    1634-04-4
Testolactone CIII    125mg    睾内酯酮标准品    968-93-4 
Testosterone CIII    125mg    睾酮标准品    58-22-0 
Testosterone Cypionate CIII    200mg    环戊丙酸睾酮标准品    58-20-8 
Testosterone Enanthate CIII    200mg    庚酸睾酮标准品    315-37-7 
Testosterone Propionate CIII    200mg    丙酸睾丸素标准品    57-85-2 
原代细胞