培养原代细胞的冻存步骤

原代细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。 
1． 冻存细胞 
（1）选对数增生期细胞(证明无支原体污染)，在冻存前1d换液。 
（2）按常规方法把培养细胞制备成悬液，计数，使细胞密度达5×10 7 ／ml左右密度，离心，去上清。 
（3）加入配制好的冻存液（培养液6.8ml，小牛血清2ml，DMSO 1ml，5.6%NaHCO3 0.1ml），按与去上清相同的量一滴一滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。冻存细胞时培养液中加入保护剂10％二甲基亚砜(DMSO) 或甘油，可使冰点降低，使细胞内水分在冻结前透出细胞外。 
（4）分装于无菌冻存管中，每管加1.5m悬液。 
（5）旋好冻存管并仔细检查，一定要盖紧，做好标记。 
（6）冻存：在特殊的 仪器 或简易的液氮容器中，按-1℃／min的速度，在30～40min时间内，下降到液氮表面，再停30min后，直接投入液氮中。要适当掌握下降冷冻速度，过快能影响细胞内水分透出，太慢则促进冰晶形成。 
操作时应戴防护眼镜和手套，以免液氮冻伤。 原代细胞低温冻存是培养室常规工作和通用技术。细胞冻存在-196℃液氮中，储存时间几乎是无限的。细胞冻存及复苏的原则是慢冻快融。 

TLC法鉴别 黑豆 中药对照药材 120975-200203 5.0g

TLC法鉴别 山豆根 中药对照药材 120976-200503 2.0g

TLC法鉴别 北豆根 中药对照药材 120977-200303 1.0g

TLC法鉴别 白鲜皮 中药对照药材 120978-200503 1.0g

TLC法鉴别 罗布麻叶 中药对照药材 120979-200503 2.0g

TLC法鉴别 虎杖 中药对照药材 120980-200503 0.5g

TLC法鉴别 枳壳(酸橙) 中药对照药材 120981-200403 1.0g

TLC法鉴别 麝香 中药对照药材 120982-200303 20mg
 原代细胞