原代细胞克隆形成试验

概念：

原代细胞克隆形成率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

基本步骤：

1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。

2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。

3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。

4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。zui后计算克隆形成率。

克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%

平板克隆形成试验方法简单，适用于贴壁生长的原代细胞。适宜底物为玻璃的、塑料瓶皿。试验成功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。

552-46-5 1-萘胺盐酸盐;1-氨基萘盐酸盐; α-萘胺盐酸盐 英文名称： CAS号： 1-NaphthylaMine hydrochloride;1-AMinonaphthalene hydrochloride;

90-15-3 1-萘酚;α-萘酚;α-羟基萘;1-羟基萘 英文名称： CAS号： 1-Naphthol;1-Naphthalenol;α-Hydroxynaphthalene;1-Hydroxynaphthalene

330581-20-9 1-萘酚-3,6-二磺酸钠 英文名称： CAS号： 1-Naphthol-3,6-disulfonic acid disodiuM salt hydrate

596-01-0 1-萘酚酞;α-萘酚酞 英文名称： CAS号： 1-Naphtholphthalein;α-Naphtholphthalein;p-α-Naphtholphthalein;3,3-Bis(4-hydroxy-1-naphthyl)-phthalide

13922-41-3 1-萘基硼酸 英文名称： CAS号： 1-Naphthylboronic acid

66-77-3 1-萘甲醛;α-萘甲醛 英文名称： CAS号： 1-Naphthaldehyde;

86-55-5 1-萘甲酸;α-萘甲酸;1-萘羧酸 英文名称： CAS号： 1-Naphthoic acid;Naphthalene-1-carboxylic acid

879-18-5 1-萘甲酰氯 英文名称： CAS号： 1-Naphthoyl chloride
原代细胞