酶联免疫试剂盒的核心在于抗原抗体反应的特异性。当抗原与相应抗体相遇时,它们能够像钥匙与锁一样准确匹配并结合。在试剂盒中,先将已知的抗原或抗体固定于固相载体(如聚苯乙烯微量板),形成固相成分。然后加入待测样本,若样本中存在相应的抗体或抗原,就会与固相成分发生特异性结合,形成复合物。接着再加入酶标抗体(或抗原),使其与已结合在固相上的抗原(或抗体)进一步结合,此时酶也固定在了固相上。加入底物,酶会催化底物发生显色反应,通过检测颜色的深浅即可判断样本中目标物质的存在与否及含量情况。
酶联免疫试剂盒的组成部分:
1.包被板:这是试剂盒的重要组成部分,通常采用聚苯乙烯微量板作为固相载体。其表面经过特殊处理,能够使抗原或抗体牢固地附着在上面,为后续的免疫反应提供稳定的场所。
2.酶标抗体(或抗原):它是将酶与抗体(或抗原)通过化学方法偶联在一起的结合物。其中的抗体(或抗原)具有特异性识别目标抗原(或抗体)的能力,而酶则能在后续的反应中催化底物显色,从而实现对免疫反应的可视化检测。
3.底物:是酶作用的对象,在酶的催化下会发生显色反应,产生易于观察的颜色变化,以便确定免疫反应是否发生以及反应的程度。
4.标准品:具有已知浓度的一系列物质,用于绘制标准曲线。在检测过程中,将标准品与待测样本在相同条件下进行检测,通过比较待测样本的显色程度与标准品的显色程度,从而确定待测样本中目标物质的浓度。
5.样本稀释液:用于对样本进行稀释,保证样本的性质稳定,同时使稀释后的样本符合检测的要求,确保检测结果的准确性。
6.洗涤液:用于清洗反应过程中未结合的成分,去除杂质和多余的物质,减少非特异性反应的发生,提高检测的特异性和准确性。