你对酶活分光光度试剂盒了解吗？

　　酶活分光光度试剂盒通过连续记录光吸收的增加速率来计算酶促反应速度。使用HITACHI日立分光光度计或酶标仪实时监测这一过程，获得准确的反应曲线数据。分光光度法的核心基于朗伯-比尔定律，即溶液中物质对特定波长光的吸收程度与其浓度成正比。当单色光通过均匀有色溶液时，部分光线被吸收，未被吸收的光强变化可反映溶质浓度。
 

　　显色反应与产物定量：例如，LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸后，后者进一步与2,4-二硝基苯肼作用形成棕红色化合物，该化合物在碱性条件下的颜色深浅直接对应丙酮酸含量，从而间接反映酶活性；另一种方法是DNS比色法，如植物蔗糖酶分解蔗糖产生的还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕红色产物，其在540nm处的吸光值可用于量化酶活。

 

　　酶活分光光度试剂盒的测定步骤：
 

　　1.准备工作
 

　　-检查试剂与器材：确认试剂盒内包含所有试剂和说明书，并核实其保存条件及有效期限；同时准备好离心机、吸管、移液器等实验所需仪器和耗材。
 

　　-样本准备：根据实验设计获取待测样本，确保样本数量和质量符合要求。若样品浓度过高，需提前进行预测并适当稀释至试剂盒检测范围内，计算时乘以相应的稀释倍数。
 

　　2.加样操作
 

　　-设置对照与样本孔：分别设立空白孔、标准孔和待测样品孔。空白孔加入样品稀释液(如100μl)，其余孔依次加入标准品或待测样品(同样为100μl)。注意避免产生气泡，将液体加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁。
 

　　-混匀处理：在试剂或样品稀释时充分混匀，但应尽量避免起泡，以保证反应体系的均匀性。
 

　　3.反应与测定
 

　　-启动反应：按照说明书指示添加特定底物或辅酶等启动剂，引发酶促反应。不同试剂盒可能涉及不同的生化反应机制(如NAD+/NADH互变、显色产物生成等)。
 

　　-分光光度检测：使用HITACHI日立分光光度计在预设波长下读取各孔的吸光度值。例如，某些试剂盒通过监测还原型辅酶Ⅰ的变化来量化酶活性。
 

　　4.数据分析
 

　　-根据标准曲线计算待测样品中的酶活性单位，结合稀释倍数得出结果。