原代细胞的类型及解决方法

原代细胞细菌污染

    细胞中如果污染细菌，zui常见的有枯草杆菌等革兰阳性菌以及大肠杆菌、假单孢菌等革兰阴性菌，其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后，会很快出现培养液变混浊，pH 改变。

    也有少数培养液肉眼观察无多少改变，只能在镜下发现菌体才知污染。所以，每天应仔细观察。污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，zui后变圆脱落死亡，造成实验失败和细胞株(系)丢失。

    细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。

    如何预防

         仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够、压力足够。
        

            重点检查和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意。
        

            下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象，可在培养液中加相应的抗生素处理。
    霉菌污染     

    霉菌污染以后，培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37 度孵箱培养 2-3 天，仍清亮，但出现絮状杂质。镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差。

    用硫酸铜溶液擦拭 CO2 孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体, 可以防止霉菌污染。

    CO2 孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2 月左右），尤其在多雨的季节。

    其它培养箱清洗方法是：用 84 液擦洗－清水擦洗－75% 酒精擦洗－紫外灯照。

    如何预防

        可在培养基里加 3u/mL 的两性霉素或制霉菌素或放线菌素 D 或双抗。
        

       细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素 D 或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。
        

         将环境*消毒，如果所有原代细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作。
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原代细胞