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产品名称 | 英文名称 | 物种 |
肝脏磷酸果糖激酶(PFKL)重组蛋白 | Recombinant Phosphofructokinase, Liver (PFKL) | Rattus norvegicus (Rat,大鼠) |
商品介绍:
PFK-B; 6-phosphofructokinase type B; Phosphofructo-1-kinase isozyme B; Phosphohexokinase 酶与激酶 物种:Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 来源:原核表达 宿主E.coli 内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定) 亚细胞定位::细胞质 预测分子量:45.7kDa 实际分子量:43kDa(差异分析请参阅说明书) 片段与标签:Ala2~His390 with N-terminal His Tag 缓冲液成份:100mM NaHCO3, 500mM NaCl缓冲液(pH8.3,含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300) 性状:冻干粉 纯度:> 95% 等电点:6.0 应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 规格10μg50μg200μg1mg5mg |
蛋白表达及纯化:
1.培养500ml哺乳动物细胞,然后将重组质粒转染到细胞中,通过瞬时表达产生目标蛋白。
2.收集含有目标蛋白的部分(细胞或培养上清)。
3.通过亲和,离子交换,疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。
4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。
5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
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注意事项:
1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同,应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。
2、虽然作用温和,但能硬化组织,固定时间过久会导致组织变脆,切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。
3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基,使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 掩盖某些抗原决定簇,使之不能充分暴露,可造成假阴性的染色,影响免疫组化结果。因此,4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时,有时需要对抗原先进行修复,然后才能进行免疫染色等后续操作。
4、本产品对人体有害,操作时请小心,并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。
5、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作
操作步骤:
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1. 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂, 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2. 每100mg固体组织置于培养皿中,剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1 mL冷 Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3. 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5 min;
4. 取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1. 贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2. 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中, 1000转/分离心10 min,再用10mL/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5 min洗两次;
3. 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂, 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
4. 细胞洗涤后,转至新的预冷的离心管中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
107个 | 0.5 mL~1 mL |
5×106个 | 0.2 mL~0.5 mL |
5.置于4℃摇床平台上,温和振荡15 min;
6. 14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量(Bradford法、BCA法);
7. 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Cytokeratin 19产品名称: 细胞角蛋白19单克隆抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat
CXCL16产品名称: CXC趋化因子16抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat
phospho-AMPK alpha 1 (Ser356)产品名称: 苷单磷suan活化蛋白激meiα1/AMPK α 1抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Sheep
RBPJK产品名称: tch转录调控蛋白RBPJK抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit
phospho-SCNN1B (Thr615)产品名称: 上皮钠通道β2抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Cow, Horse, Rabbit, GuineaPig
Histone H3 (acetyl K9)产品名称: 乙酰化组蛋白H3抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Rabbit, Fruit Fly
应用类型: Other英文名称: HLA-DQA1英文别名: CD; CELIAC1; DC 1 alpha chain; DC alpha; DC-1 alpha chain; DC-alpha; DC1, included; DQ alpha 1 chain; DQ-A1; DQ-DRW9 alpha chain; DQA1_HUMAN; FLJ27088; FLJ27328; Gluten-sensitive enteropathy (celiac disease); GSE; HLA class II histocompatibility antigen; HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain; HLA class II histocompatibility antigen, DQ(W3) alpha chain; HLA-DCA; HLA-DQA; HLA-DQA1; HLA-DQA1 major histocompatibility complex, class II, DQ alpha 1; HLADC histocompatibility type; Immune response antigens HIa, included; leucocyte antigen DQA1; leukocyte antigen alpha chain; Major
Phospho-Beta Catenin (Ser675)产品名称: β 连环su蛋白抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
CT054产品名称: 核黄su转运蛋白2抗体交叉反应: Human, Mouse
IL6ST/CD130产品名称: 白细胞介su6受体β/CD130抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat
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