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产品名称：恶性黑色素瘤细胞;A-375

规格：1×10⁶cells/T25培养瓶
货号：YS-02X9523

细胞生长实验 ：细胞生长良好，形态正常

储存条件：2℃-8℃，避光储存

运输条件：冰袋冷藏运输
公司产品仅用于科研

细胞特性：

1)】组织来源于实验动物的正常眼组织。

2)细胞鉴定：细胞免疫荧光染色为阳性。

3)经鉴定细胞纯度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5)细胞生长方式：上皮样，不规则细胞，贴壁培养。

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备RPMI-1640 培养基；优质胎牛血清，10%；Glutamax（invitrogen 35050061），1%；Sodium pyruvate（invitrogen 11360070），1%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

注意事项：

（1）冻存前细胞状态，细胞最好在对数生长期，细胞密度适合，刚刚发生细胞融合，过密或连成片的细胞状态不好，而且消化时不容易分散；

（2）冻存的密度不宜过低，10的6次方-7次方的数量级比较好，我冻存的细胞一般T25培养瓶（5*107），一瓶冻一管（1.5ml冻存管），10cm培养皿（大概10的8次方个细胞）分成两管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化过度，吹打不可太用力，最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培养基吹打哦，不是加入冻存液再吹打。

（4）离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格，我从10%-90%都用过，问题不大，个人认为10%-20%可以了，能节约处就节约点嘛！另外，冻存液可以在处理细胞前配置，放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬，移入冻存管。

（5）关于“慢冻"，传统的方法，LLC细胞冻存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更长，-80度过夜，最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室，推荐使用程序降温盒，内装异丙醇，在-80度并内可以逐渐降温，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。

ER- Alpha(phospho-Tyr537)/FITC 荧光素标记抗大、小鼠磷酸化雌受体α抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rabbit  dog IgG/Gold 金标记兔抗狗IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies规格： 2ml

成纤维细胞生长因子-10/纤维母细胞生长因子-10抗体  FGF-10 0.2ml

Goat  Guinea pig IgG/Cy3 Cy3标记的羊抗豚鼠IgG 0.1ml

FOXI1 英文名称： 叉头蛋白I1抗体 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-Stathmin(Ser38) 磷酸化原癌基因蛋白18抗体 规格 0.1ml

Rabbit  dog IgG/Gold 金标记兔抗狗IgG (10nm/15nm)Multi-class antibodies规格： 2ml

LYVE-1(lymphalic vessel endotheilial hyaluronan receptor 1) 管内皮透明质酸受体抗原Multi-class antibodies规格： 0.5mg

 Alkaline phosphatase/PLAP 碱性磷酸酶抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Ser735) 磷酸化非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体 规格 0.1ml

蛋白酶K浓缩液(20X) 1ml 400ug/ml pH 8.0

VAP1 英文名称： 血管粘附蛋白1抗体 0.1ml

phospho-DAG1 (Tyr892) 英文名称： 磷酸化肌相关蛋白DAG1抗体 0.1ml

 Alkaline phosphatase/PLAP 碱性磷酸酶抗体Multi-class antibodies规格： 0.1ml

Streptokinase 英文名称： 链激酶抗体 0.1ml

eIF3K 英文名称： 真核翻译起始因子3K抗体 0.2ml

受体相关蛋白16抗体  TRA16 0.2ml

 TRA16/FITC 荧光素标记受体相关蛋白16抗体IgGMulti-class antibodies规格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh phospho-ITGB4(Tyr1526) 磷酸化整合素β4抗体 规格 0.1ml

PR (Progestogerone receptor) 孕受体(抗原)Multi-class antibodies规格： 0.5mg
恶性黑色素瘤细胞;A-375DBD-NCS [=4-(N,N-二甲基氨磺酰)-7-异硫酸基-2,1,3-苯并恶二唑]重楼皂苷 Ⅶ植物V型ATP酶（V type ATPase ）活性比色法定量检测试剂盒

氯甲酸-9-芴甲酯(>97.0%(HPLC)(T))总银杏酸（套）动物线粒体F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量检测试剂盒

邻苯二甲(>99.0%(GC))黄芩素动物组织线粒体F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量检测试剂盒

2-氨基吡啶(>99.0%(GC)(T))胡黄连苷-Ⅱ植物叶绿体F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量检测试剂盒

2-氨基苯硫酚(>95.0%(T))雷公藤酯甲F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量检测试剂盒

丹磺酰肼(>95.0%(HPLC)(T))脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯酵母F型ATP酶（F type ATPase）活性比色法定量检测试剂盒

DBD-H [=4-(N,N-二甲氨基磺酰)-7-肼基-2,1,3-苯并恶二唑(>98.0%(HPLC))丹参酮ⅡA磺酸钠A型ATP酶（A type ATPase）活性比色法定量检测试剂盒

NBD-H (=4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑肼)(>98.0%(HPLC))芒果苷动物总ATP酶（total ATPase）活性比色法定量检测试剂盒

使用步骤：

一）准确称量试剂：根据不同的菌类和用途，选择适宜的培养基，培养基所需试剂必须纯净。

（二）校正pH值：将称量好的培养基各种成分放入容器内，标记划线，加热溶解，补充水分，测定酸碱度，常用pH6.8～8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。

（三）过滤：将玻璃漏斗置铁架上，再用人子宫成纤维细胞*培养基纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中，将上述培养基倒入其中过滤至透明。

（四）分装：将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内（试管内每支装5mL；三角瓶中装100～150ml），塞好棉塞用牛皮纸包扎好，准备灭菌。

（五）灭菌：培养基的灭菌，常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死，但细菌的芽胞有较强的抗热性，须经高压蒸汽灭菌才能达到*灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理，即压力越大，蒸汽温度就越高。因此，在同一温度条件下，采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下，菌体吸收水分后，其蛋白质易于凝固变性，因为蒸汽的穿透力强，杀菌效果好。