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蛋白表达及纯化：

1.培养500ml哺乳动物细胞，然后将重组质粒转染到细胞中，通过瞬时表达产生目标蛋白。

2.收集含有目标蛋白的部分（细胞或培养上清）。

3.通过亲和，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化表达的重组蛋白。

4.通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。

5.通过Western-blot验证目标蛋白正确性。
公司产品仅供科研使用，不得用于临床！

商品介绍：

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操作步骤：

Ⅰ 实体组织蛋白的提取

1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入10 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

2．  每100mg固体组织置于培养皿中，剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；

3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；

4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

Ⅱ 培养细胞蛋白提取

1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；

2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；

3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入10μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。冰上保存数分钟待用。

4． 细胞洗涤后，转至新的预冷的离心管中，加入上述配制好的冷Lysis Buffer，加入量如下表所示：

5．置于4℃摇床平台上，温和振荡15 min；

6． 14,000rpm，4℃离心15min，取上清为全蛋白提取物, 蛋白定量（Bradford法、BCA法）；

7． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。

注意事项：

1、不同细胞或组织样品所需的固定时间有所不同，应当根据细胞或组织的种类以及组织块的大小来调整固定时间。

2、虽然作用温和，但能硬化组织，固定时间过久会导致组织变脆，切片时易碎。因此固定时间通常不宜超过 24 小时。

3、醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍。分子间交联形成的网格结构可能部分或 掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露，可造成假阴性的染色，影响免疫组化结果。因此，4%固定的细胞或组织样品在进行免疫组化检测时，有时需要对抗原先进行修复，然后才能进行免疫染色等后续操作。

4、本产品对人体有害，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或吸入体内。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作 
ALPPL2产品名称: 碱性磷suanmei(类胎盘型)抗体产品别名: 类胎盘碱性磷suanmei; 碱性磷suanmei类胎盘;

Phospho-EGFR (Tyr845)产品名称: 表皮生长因子受体抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Rabbit

OMA1产品名称: 金属蛋白mei相关蛋白1抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Zebrafish, Cat

CYB5R3产品名称: 细胞色sub5还原mei3抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep

5HT1F Receptor产品名称: 5-羟色胺受体1F抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Dog, Pig, Cow, Rabbit, Sheep

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Crry产品名称: 补体调节蛋白Crry抗体交叉反应: Mouse, Rat

应用类型: Other英文名称: Histone H2B英文别名: H2B.1; H2B.1 B; H2B.b; H2B.c; H2B.d; H2B.e; H2B.f; H2B.j; H2B.q; H2BFB; H2BFC; H2BFD; H2BFE; H2BFF; H2BFJ; H2BFO; H2BFQ; H2BFS; HIRIP2; HIST1H2BB; HIST1H2BD; HIST1H2BH; HIST1H2BL; HIST1H2BM; HIST1H2BN; HIST2H2BE; Histone H2B; Histone H2B type 1 B; Histone H2B type 1 D; Histone H2B type 1 H; Histone H2B type 1 L; Histone H2B type 1 M; Histone H2B type 1 N; Histone H2B type 2 E; Histone protein; H2B GL105; H2B histone family member O; H2B histone family member S; histone H2B type 1-B; H2B1B_HUMAN.

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phospho-P53 (Ser33)产品名称: 肿基因P53抗体交叉反应: Human, Mouse, Horse   

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