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产品名称:小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞;Beta-TC-6
规格:1×10⁶cells/T25培养瓶
货号:YS-02X9829
细胞生长实验 :细胞生长良好,形态正常
储存条件:2℃-8℃,避光储存
运输条件:冰袋冷藏运输
公司产品仅用于科研
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备RPMI-1640 培养基;优质胎牛血清,10%;Glutamax(invitrogen 35050061),1%;Sodium pyruvate(invitrogen 11360070),1%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入250px皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
注意事项:
(1)冻存前细胞状态,细胞最好在对数生长期,细胞密度适合,刚刚发生细胞融合,过密或连成片的细胞状态不好,而且消化时不容易分散;
(2)冻存的密度不宜过低,10的6次方-7次方的数量级比较好,我冻存的细胞一般T25培养瓶(5*107),一瓶冻一管(1.5ml冻存管),10cm培养皿(大概10的8次方个细胞)分成两管。
(3)消化和吹打,切忌胰酶消化过度,吹打不可太用力,最好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培养基吹打哦,不是加入冻存液再吹打。
(4)离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于肿瘤细胞株而言要求不是很严格,我从10%-90%都用过,问题不大,个人认为10%-20%可以了,能节约处就节约点嘛!另外,冻存液可以在处理细胞前配置,放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬,移入冻存管。
(5)关于“慢冻",传统的方法,LLC细胞冻存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更长,-80度过夜,最后液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室,推荐使用程序降温盒,内装异丙醇,在-80度并内可以逐渐降温,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。
使用步骤:
一)准确称量试剂:根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。
(二)校正pH值:将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定。用1N NaOH和1N HCl调节pH值到适宜范围内。
(三)过滤:将玻璃漏斗置铁架上,再用人子宫成纤维细胞*培养基纱布夹棉花或用滤纸放在漏斗中,将上述培养基倒入其中过滤至透明。
(四)分装:将过滤后的培养基分装于中试管或三角瓶内(试管内每支装5mL;三角瓶中装100~150ml),塞好棉塞用牛皮纸包扎好,准备灭菌。
(五)灭菌:培养基的灭菌,常用高压蒸汽灭菌法。一般微生物的营养细胞在水中煮沸后即被杀死,但细菌的芽胞有较强的抗热性,须经高压蒸汽灭菌才能达到*灭菌的目的。根据蒸汽温度随压力升高而上升的原理,即压力越大,蒸汽温度就越高。因此,在同一温度条件下,采用高压蒸汽灭菌比干热灭菌法效果要好。而且在湿热情况下,菌体吸收水分后,其蛋白质易于凝固变性,因为蒸汽的穿透力强,杀菌效果好。
细胞特性:
1)】组织来源于实验动物的正常眼组织。
2)细胞鉴定:细胞免疫荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
5)细胞生长方式:上皮样,不规则细胞,贴壁培养。
ZNF217/FITC 荧光素标记锌指脂蛋白217抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
CYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 细胞色素P450 3A4抗原Multi-class antibodies规格: 0.5mg
血管生成素-2抗体 ANG-2 hu, mo, rat, pig, dog, chi 0.1ml
ZNF185 英文名称: 锌指蛋白185抗体 0.2ml
DHFRL1 英文名称: 二氢叶酸还原酶样1抗体 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Estrogen Receptor alpha (Tyr537) 磷酸化雌受体α抗体 规格 0.1ml
CYP3A4(Cytochrome p450 3A4) 细胞色素P450 3A4抗原Multi-class antibodies规格: 0.5mg
P-Cadherin 人P-钙粘附蛋白Multi-class antibodies规格: 48T
Phospho-Cytokeratin 17 (Ser44) 磷酸化细胞角蛋白17抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh NS5ATP9/KIAA0101 丙型肝炎病毒非结构蛋白5A反式激活蛋白9抗体 规格 0.2ml
TMB-2HC3,3′,5,5′tetramethylbenzidine,TMB TMB 2HCl 3,3’5,5’-四甲基联胺二盐酸 250mg
TGM3 英文名称: 谷酰胺转胺酶3抗体 0.1ml
C9orf103 英文名称: 9号染色体开放阅读框103抗体 0.2ml
Phospho-Cytokeratin 17 (Ser44) 磷酸化细胞角蛋白17抗体Multi-class antibodies规格: 0.1ml
Dog IgM/Cy7 Cy7标记的兔抗犬IgM抗体 0.1ml
FAM161B 英文名称: FAM161B蛋白抗体 0.2ml
葡萄糖调节蛋白78抗体 GRP78 0.2ml
PNK1/PNKP/FITC 荧光素标记多聚合苷酸激酶3磷酸化酶抗体IgGMulti-class antibodies规格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser240/244) 磷酸化S6核糖体蛋白抗体 规格 0.1ml
Rabbit mouse IgM 兔抗小鼠IgM (亲和层析纯化)Multi-class antibodies规格: 1mg
小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞;Beta-TC-6氟尼辛葡通用型1毫升1厘米光径石英比色皿
氟尼辛葡(标准品)200微升1厘米光径玻璃比色皿
(含柠檬酸盐缓冲液)200微升1厘米光径塑料比色皿
纯粉200微升1厘米光径石英比色皿
AC-DC亚磷酰单体100微升1厘米光径玻璃比色皿
2,2'-脱水-5-甲基尿苷100微升1厘米光径塑料比色皿
7-DEAZA-7--2'-脱氧鸟苷100微升1厘米光径石英比色皿
7-Deaza-7-I-2’-dA通用96孔
上海市嘉定区澄浏公路52号
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