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产品名称:牛痘相关激酶2(VRK2)重组蛋白
物种:Mus musculus (Mouse,小鼠)
英文名称:Recombinant Vaccinia Related Kinase 2 (VRK2)
Serine/threonine-protein kinase VRK2
酶与激酶
物种:Mus musculus (Mouse,小鼠) 来源:原核表达 宿主E.coli 内毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法测定) 亚细胞定位::分泌 预测分子量:57.1kDa 实际分子量:57kDa(差异分析请参阅说明书) 片段与标签:Met1~Glu234 with N-terminal His and GST Tag 缓冲液成份:磷酸盐缓冲液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.) 性状:冻干粉 纯度:> 90% 等电点:9.2 应用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB. 规格10μg50μg200μg1mg5mg |
特点:
标记:标记反应简单、温和且很少抑制抗体活性,将与抗体共价结合是一种非常简便、直接的标记方法。
酶标记:酶标记抗体是将酶与特异性抗体经适当方法连接而成,其应用范围非常广泛,结果即时可见、敏感性高。
荧光标记:荧光基团AbFluorTM是新型的荧光标记物之一,产品覆盖350-770nm。不同的AbFluor基团经恰当的激光可发光, 从而得知抗体的定位和待测抗原的分布情况,主要用于细胞分选或高分辨率免疫染色,是一种非常好的亚细胞水平定位的方法。
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标签选择:
亲和标签:蛋白重组表达过程中采用亲和标签融合表达有两方面的作用:一方面是为了使蛋白纯化过程变得更加容易;另一方面是为了促进某些不溶性蛋白可溶。蛋白标签可分两类:一类是短肽类标签;一类是长肽以融合蛋白(fused partner)形式共表达。使用不同的蛋白标签需要根据具体案例来分析。
不同的系统步骤稍微有些不同的,大致步骤如下:
真核表达系统的重组蛋白表达步骤:
a. 选择表达载体和宿主细胞(常用的CHO和HEK293)
b. 表达载体的构建
c. 无内毒素的质粒抽提
d. 细胞瞬时转染
e. 表达小试,条件优化
f. 表达分析和鉴定(SDS-PGAE和WB)
g. 大量表达
h. 亲和纯化
i. 检测和鉴定
原核表达系统的重组蛋白表达步骤:
a. 选择表达载体
b. 密码子优化
c. 基因合成/亚克隆
d. 转化表达菌株
e. 蛋白表达小试分析
f. 如果蛋白可溶,蛋白亲和纯化
g. 如果蛋白不可溶,则需要变复性来制备可溶蛋白。
h. 鉴定,包括SDS-PAGE和WB鉴定
GZMH蛋白;表达蛋白的分析、纯化、检测
诱导表达成功后,表达蛋白的分析、纯化、检测应该顺当,按一般的实验步骤做没太大的问题。
HSPA4产品名称: 热休克蛋白70蛋白4抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
CBL产品名称: 原基因CBL2抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat
IL-23产品名称: 白介su-23抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat
DCAMKL1产品名称: 丝氨suan/苏氨suan蛋白激meiDCAMKL1单克隆抗体交叉反应: Human, Mouse
C2orf18产品名称: 2号染色体开放阅读框18抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
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CEA(B5)产品名称: 胚抗原单克隆抗体(检测)交叉反应: Human
TMA16产品名称: 4号染色体开放阅读框43/FLJ11184抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep
TMEM62产品名称: 跨膜蛋白62抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Horse, Rabbit, Sheep
Aquaporin 4产品名称: 水通道蛋白4单克隆抗体交叉反应: Human, Mouse, Rat
牛痘相关激酶2(VRK2)重组蛋白人CD200受体1(CD200R1)ELISA试剂盒CD200R1CD200受体1elisa kitHuman CD200 Receptor 1(CD200R1)ELISA Kit
人CD200分子(CD200)ELISA试剂盒CD200CD200分子ELISA试剂盒Human Cluster Of Differentiation 200(CD200)ELISA Kit
人CD160分子(CD160)ELISA试剂盒CD160CD160分子elisamei联免疫试剂盒Human Cluster Of Differentiation 160(CD160)ELISA Kit
人CD109分子(CD109)ELISA试剂盒CD109CD109分子elisa检测试剂盒Human Cluster Of Differentiation 109(CD109)ELISA Kit
人CCAAT增强子结合蛋白γ(CEBPγ)ELISA试剂盒CEBPγCCAAT增强子结合蛋白γelisa kitHuman CCAAT/Enhancer Binding Protein Gamma(CEBPg)ELISA Kit
操作步骤 :
根据使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui终浓度为 1mM。混匀备用(PMSF 现用现加)。
1、样品前处理:
a)对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。按照 6 孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。
b)对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管,然后再裂解。
c)对于组织样品: 把切成细小的碎片。按照每 20mg 组织加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量)。用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
2、后处理:
将裂解后的样品 10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的蛋白浓度测定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作
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