大鼠肠神经嵴干细胞图片体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的优良培养状态。

细胞简介：

产品名称 大鼠肠神经嵴干细胞

组织来源 肠组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 大鼠肠神经嵴干细胞分离自肠组织；神经嵴干细胞（neural crest stem cells，NCSC），即外周神经系统干细胞，起源于胚胎期的神经管背侧，与中枢神经系统干细胞在形态学上有着显著不同，NCSC可表达低亲和力神经营养因子受体p75NTR而不能分化出少突胶质细胞，而中枢神经系统干细胞与之恰好相反。NCSC可在不同部位分化出多种组织，如神经元、神经胶质、黑色素细胞、内分泌细胞、平滑肌、骨骼肌及骨等，其中可特异性分化出肠神经系统中神经元和神经胶质的NCSC，被称为肠神经嵴干细胞（gut neural crest stem cells, GNCSC）。

方法简介 实验室分离的大鼠肠神经嵴干细胞采用-胶原酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的大鼠肠神经嵴干细胞经Nestin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25%、培养基

培养基： 大鼠肠神经嵴干细胞培养基(含B-27 Supplement、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 球形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-3代左右；3代以内状态

消化液： 0.25%

冻存步骤：

‌

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。