大鼠股骨头微血管内皮细胞培养体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 大鼠股骨头微血管内皮细胞

组织来源 骨组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 大鼠股骨头微血管内皮细胞分离自骨组织；股骨头（caput femoris）呈圆形，约占一圆球的2/3，其上为关节软骨所覆盖，在其顶部微后有一小窝，称为股骨头凹，为股骨头韧带附着处，股骨头可由此获得少量血供。股骨头骨髓的微血管结构为珊瑚状，后毛细血管微动脉与微静脉部分膨大、迂曲、互相缠绕；骨微血管内皮细胞构成了骨内微血管的内衬，与骨内其他成分联系密切，参与了许多骨的病理生理过程在骨吸收新骨的形成血管再生营养物质转运骨内代谢产物输出及维持骨内微环境平衡方面具有重要作用。

方法简介 实验室分离的大鼠股骨头微血管内皮细胞采用混合胶原酶消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的大鼠股骨头微血管内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂：0.25%或Accutase细胞消化液、多聚-L-赖溶液（1×）或多聚-L-赖溶液（10×）或明胶包被液（1mg/mL）、PBS、培养基

包被条件：PLL（0.1mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基：大鼠股骨头微血管内皮细胞 培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率：每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代比例：1:2

传代特性：可传1-3代左右；2代以内状态佳

消化液：0.25%

冻存步骤：

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冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。