犬脐带间充质干细胞品牌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 犬脐带间充质干细胞

组织来源 脐带组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 犬脐带间充质干细胞分离自脐带；脐带是哺乳类的连接胎儿和胎盘的管状结构。原来是由羊膜包卷着卵黄囊和尿膜的柄状伸长部而形成的。脐带中通过尿膜的血管即脐动脉和脐静脉，卵黄囊的血管即脐肠系膜动脉及脐肠系膜静脉。当卵黄囊及其血管退化，脐动脉和脐静脉就发达起来，在这些间隙中可以看到疏松的胶状的间充质。在子宫中，子宫动脉在胎盘的母体部分出的毛细血管，与胎盘的子体部胎儿毛细血管靠近，在此处母体和胎儿的血液间进行CO₂和O₂，代谢产物即代谢废物和营养物质的交换。脐动脉将胎儿来的废物运送至胎盘，脐静脉将O₂和营养物质从胎盘运送给胎儿。后由子宫静脉将来自胎儿的代谢废物运走，某种激素和抗体等也通过脐带从母体移交给胎儿。脐带中含有大量的干细胞，干细胞是生命的种子，它会分化成机体的各种细胞，结出各种不同的果实——血液细胞、神经细胞、骨骼细胞等。干细胞是具有自我更新、高度增殖和多项分化潜能的细胞群体；这些细胞可以通过分裂维持自身细胞的特性和数量，又可进一步分化为各种组织细胞，从而在组织修复等方面发挥积极作用。间充质干细胞（MSC）是一种具有高度自我更新和多向分化潜能的干细胞。在不同的诱导条件下，可分化为多种造血细胞以外的组织细胞，并具有造血支持、免疫调节、组织修复等作用；目前，多用于风湿免疫疾病的治疗。间充质干细胞（MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞，存在于骨髓、脂肪组织、脐血及多种胎儿组织。它可分泌多种细胞因子及生长因子，促进造血干细胞（HSC）的增殖与分化。MSCs还具有免疫调节、抗炎和组织修复作用，可减轻移植物抗宿主病（GVHD）及其他移植相关并发症。

方法简介 实验室分离的犬脐带间充质干细胞采用组织贴块法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的犬脐带间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25%  、PBS  、培养基

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤维细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3-5代左右

消化液：0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。