人表皮角化细胞品牌体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 人表皮角化细胞

组织来源 皮肤组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 人表皮角化细胞分离自皮肤组织；表皮位于动物皮肤的外层，由胚胎时期外胚层形成，具有抗摩擦和抗损伤的作用。表皮是皮肤的浅层结构，由复层扁平上皮构成。从基底层到表面可分为五层，即基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。依据细胞的分化状态、功能类型可以分为多种细胞类型，表皮角化上皮细胞与角质形成细胞核心细胞群体本质是同一细胞群体，前者从“表皮属角化复层扁平上皮"的组织属性命名，后者从“合成角蛋白、执行角化功能"的功能特征命名，二者均涵盖表皮从基底层增殖细胞到角质层终末细胞的全分化谱系，且占表皮细胞总量超90%，是表皮屏障功能的核心载体。在这一分化谱系中，存在明确的阶段差异：基底层细胞是角质形成细胞的“增殖源头"，呈柱状、有完整活性细胞核，以K5、K14、Ki-67、干细胞标志物p63为核心，无角化相关蛋白，未启动角化，一般描述为角化形成细胞/角质形成细胞/角化上皮细胞等；当细胞迁移至棘层中上部至颗粒层，成为“角化细胞"——这是仍含固缩细胞核（但细胞器减少）的中间活细胞，能主动合成角蛋白与丝聚蛋白前体，处于“正在角化"的执行阶段，表达切换为K1、K10为主，同时表达丝聚蛋白前体（丝聚合蛋白原，颗粒层特征）、转酶1（TG1，促进角蛋白交联），Ki-67阴性；终角化细胞进一步退化，在角质层形成“角质细胞"（角质层终末细胞），这是无细胞核、无细胞器的终末细胞，胞质充满交联角蛋白纤维，通过细胞间连接构成表皮物理屏障，无核相关标志物，以终末成熟标志物兜甲蛋白、小富脯蛋白（SPRRs）为特征，K1、K10持续存在但无活性合成功能；PCNA是增殖细胞的标志物，表皮角质形成细胞在基底层（增殖活跃区）可能表达PCNA，而终末分化层（角质层）可能不表达，细胞在不同增殖状态表达量不一样；这四种细胞的核心差异在于分化阶段（全阶段/中间态/终末态）、形态（核与细胞器有无/活性）及功能（增殖/合成/屏障），且存在“角质形成细胞（表皮角化上皮细胞）包含角化细胞与角质细胞"的逻辑关系。表皮也包含其他非角化上皮细胞：黑色素细胞（Melanocytes）、朗格汉斯细胞（Langerhanscells）、Merkel细胞等。

方法简介 实验室分离的人表皮角化细胞先消化、后-胶原酶混合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的人表皮角化细胞经K1免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25%  、鼠尾胶原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾胶原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL）  、PBS  、培养基

包被条件： 鼠尾胶原Ⅰ（2-5 μg/cm²）

培养基： 人表皮角化细胞培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 上皮细胞样

传代特性： 不增殖；不传代

消化液：0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。