人肺小动脉内皮细胞规格体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 人肺小动脉内皮细胞

组织来源 肺小动脉组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 人肺小动脉内皮细胞分离自肺小动脉组织；肺动脉干是短而粗的动脉，自右心室的动脉圆锥起始，向左后上方斜升，先在升主动脉根部的前面，继而至其左侧，至主动脉弓的下方，约在第5胸椎高度，分为左、右肺动脉。左肺动脉较短，横行向左，经左主支气管前方至左肺门，分两支进入左肺的上、下叶。右肺动脉较长，横行向右，经主动脉升部和上腔静脉的后方达右肺门，分3支进入右肺上、中、下叶。左、右肺动脉的各分支在肺实质内又反复分支，与支气管的分支伴行，后达肺泡壁，形成稠密的毛细血管网。肺动脉输送的是含二氧化碳较多的静脉血。在肺动脉干分叉处稍左侧与主动脉弓下缘之间有一结缔组织索，称动脉韧带。管径在0.3-1 mm之间，为小动脉（small-artery），小动脉包括粗细不等的几级分支，也属肌性动脉。较大的小动脉，内膜有明显的内弹性膜，中膜有几层平滑肌，外膜厚度与中膜相近，一般没有外弹性膜。口径在1mm以下的动脉，管壁有完整的平滑肌层及少量的弹性纤维和胶质纤维。小动脉是决定周围循环阻力大小的主要因素，也是调节微循环灌注量的“总开关"。典型的小动脉，其管壁的厚度与管径相比约为1：2。中膜的肌层相对比其他动脉为厚，当平滑肌在神经支配下强力收缩时，其管腔可以闭塞，而使血液不能流入它所分布的毛细血管内，从而增加了周围血液循环的阻力。如果有许多小动脉同时收缩，可使血压显著上升。反之，当小动脉的平滑肌舒张时，则可使大量的血液流入毛细血管，外周阻力明显下降，血压降低。终末小动脉（terminal arteri-ole）的口径为20-30 μm；后小动脉（metar-teriole），又称毛细血管前小动脉（precapil-lary arteriole）的口径为12-15 μm。管壁内均有较稀疏的平滑肌，在毛细血管前小动脉分支的起始部分，管壁平滑肌成分增厚，叫做毛细血管前括约肌（precapillary sphinc-ter），其收缩或舒张，可调节真毛细血管的血流量，是调节微循环灌注量的“分开关"。支配小动脉平滑肌的交感神经纤维，可延伸到终末小动脉和后小动脉的平滑肌细胞。在毛细血管前括约肌上交感神经纤维特别丰富。肺小动脉内皮细胞呈单层多角形铺路石状分布，该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。

方法简介 实验室分离的人肺小动脉内皮细胞采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的人肺小动脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25%  、多聚-L-赖溶液（1×）或多聚-L-赖溶液（10×）或明胶包被液（1 mg/mL）  、PBS  、培养基

包被条件： PLL（0.1 mg/mL）或明胶（0.1%）

培养基： 人肺小动脉内皮细胞培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 内皮细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液：0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。