人胰腺癌组织源星状细胞图片体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 人胰腺癌组织源星状细胞

组织来源 胰腺癌组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 人胰腺癌组织源星状细胞分离自患有胰腺癌病人的胰腺癌组织；胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。其发病率和死亡率近年来明显上升。5年生存率<1%，是预后差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，而很低。胰腺癌的病因尚不十分清楚。其发生与吸烟、饮酒、高脂肪和高蛋白饮食、过量饮用咖啡、环境污染及遗传因素有关；近年来的调查报告发现糖尿病人群中胰腺癌的发病率明显高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人与胰腺癌的发病存在一定关系，发现慢性胰腺炎病人发生胰腺癌的比例明显增高；另外还有许多因素与此病的发生有一定关系，如职业、环境、地理等。随着医学技术的进步，大部分癌症的生存率都在提高，例如乳腺癌，结直肠癌等肿瘤，近几十年来，生存率得到了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滞不前，缺乏有效的治疗方法，高的死亡率使其成为“癌中王"，近年来胰腺癌微环境的研究引起了诸多学者的重视。胰腺癌微环境构成复杂，其中，胰腺星状细胞是胰腺癌微环境中重要的间质细胞之一，在胰腺癌细胞生长、迁移、侵袭、血管生成、免疫逃逸、转移及耐药中发挥重要的作用。因此针对胰腺星状细胞和胰腺癌细胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的预后。胰腺星状细胞（pancreaticstellate cells, PSC）是一种胰腺特异性间质细胞，多在胰腺组织内血管和导管周围聚集，环绕在腺泡的基底部位，正常静比状态下只占胰腺细胞的4%左右，细胞质中含有丰富的生素A脂滴，以表达胶质纤丝酸性蛋白质（glial filament acidic protein, GFAP）、结合蛋白（Desmin）为特征。在胰腺组织损伤、应激等条件下PSC被激活，成为一种肌成纤细胞，胞质中富含生素A的脂滴消失，以表达α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA）为标志，能大量合成细胞外基质（extracellular matrix, ECM）和分泌多种细胞因子。胰腺癌微环境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的发生发展中起着重要作用。PSC通过诱导胰腺癌细胞（pancreatic cancercells, PCC）上皮一间质转变（epithelial-mesenchymaltransition, EMT）促进胰腺癌侵袭和转移侵袭和转移是肿瘤细胞脱离原发肿瘤灶到达靶器官的一个多步骤过程，众多研究表明EMT与胰腺癌的侵袭转移密切相关。EMT主要的特征是上皮细胞特征丢失同时伴间质细胞特征获得，如E一钙茹蛋白（E-cadherin）表达下降，波形蛋白（Vimentin）表达上调。karnevi等研究发现，PSC与PCC共培养后能够诱导PCC上皮性细胞标志（E-cadherin, β-catenin）丢失，促进间质性细胞标志（Vimentin, Snai-1）获得，表明PSC在PCC的EMT形成过程中发挥了重要的作用。PSC参与胰腺癌进展的各个环节，而PSC活化是PSC发挥功能的重要部分。因此，如能抑制PSC活化或控制PSC细胞功能将为胰腺癌治疗提供潜在的治疗策略。因此，随着针对抑制PSC活化或其功能的研究的深入，有望从胰腺癌微环境角度切实提高胰腺癌的治疗效果。

方法简介 实验室分离的人胰腺癌组织源星状细胞采用胶原酶消化法结合密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的人胰腺癌组织源星状细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 人胰腺癌组织源星状细胞培养基(含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传2-3代

消化液： 0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。