兔骨内膜间充质干细胞培养体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 兔骨内膜间充质干细胞

组织来源 股骨、胫骨

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 兔骨内膜间充质干细胞分离自股骨、胫骨；骨内膜是层致密结缔组织膜，覆盖在骨的表面（关节面除外），新鲜骨内膜呈粉红色，含有丰富的血管、神经和成骨细胞。此外，附着于骨的肌腱、韧带于附着部位都与骨内膜编织在起。因而骨内膜与骨质结合甚为牢固。骨内膜富含血管、神经，通过骨质的滋养孔分布于骨质和骨髓。骨内膜分内、外两层，外层主要是粗大的胶原纤束，部分纤穿入骨质，使骨内膜固定于骨面；内层疏松，含成骨细胞和破骨细胞（分别具有产生新骨质和改建骨的功能）。骨髓腔和骨松质的网眼也衬着层菲薄的结缔组织膜，叫做骨膜。骨内膜的内层和骨膜有分化成骨细胞和破骨细胞的能力，以形成新骨质和破坏、改造已生成的骨质，所以对骨的发生、生长、修复等具有重要意义。骨内膜间充质干细胞是种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可以向骨、软骨、肌组织、皮肤、脂肪、神经等多种组织分化，因此可以作为组织工程中的种子细胞。骨内膜间充质干细胞的体外培养条件要求较高，在培养过程中，受贴壁时间、种植密度、血清含量、培养温度和培养基pH值等条件的影响。

方法简介 实验室分离的兔骨内膜间充质干细胞采用冲洗骨髓、消化骨内膜、差速贴壁法结合培养基筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的兔骨内膜间充质干细胞经CD90免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 兔骨内膜间充质干细胞 培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液： 0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。