兔滑膜成纤细胞价格体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 兔滑膜成纤细胞

组织来源 滑膜组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 兔滑膜成纤细胞分离自滑膜组织；滑膜组织是位于关节腔内面的内衬结构，各种关节内疾病均会累及滑膜。而滑膜细胞是持关节正常功能的重要组织结构，同时在各种关节疾患中也是主要病变部位。骨关节炎（OA）以关节软骨退行性变为特征，其病理改变累及关节的各个组成部分，但绝不仅局限于软骨，还包括软骨下骨、滑膜、半月板和韧带。各组成部分的病理改变相互影响，相互作用，共同加速关节的退变。滑膜细胞是构成滑膜层的细胞群体，是持关节正常功能的重要组织结构，它包埋在颗粒状无定性的基质中，基质内有分散的纤分布。滑膜由A型（巨噬样滑膜细胞）、B型（成纤样滑膜细胞）以及C型（树突细胞样滑膜细胞）细胞组成。

方法简介 实验室分离的兔滑膜成纤细胞采用混合酶消化结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的兔滑膜成纤细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 兔滑膜成纤细胞培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。