兔胚胎成纤细胞图片体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 兔胚胎成纤细胞

组织来源 胚胎组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 兔胚胎成纤细胞（Rabbit Embryonic Fibroblasts, REFs）分离自胚胎组织，是从妊娠中期（通常为胚胎发育12.5-14.5天）的兔胚胎中分离获得的成纤样间质细胞，属于贴壁生长的原代成纤细胞，具有典型的成纤细胞形态与生物学功能，是哺乳动物细胞生物学研究中常用的模式细胞之。般通过剔除胚胎的头部、内脏（如心脏、肝脏）及四肢，保留躯干部分，酶消化分离获得，典型形态为长梭形或不规则多边形（生长形态特性与成纤细胞相似），呈贴壁生长，培养过程中易形成方向性排列，增殖能力较强（原代至P5代前增殖活跃，随传代次数增加逐渐出现衰老现象）；可分泌多种细胞因子（如白血病抑制因子LIF、成纤细胞生长因子FGF）、extracellularmatrix（ECM）成分（如胶原蛋白、纤连蛋白），为其他细胞生长提供微环境支持，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的些因子；表达成纤细胞特异性标志物（如波形蛋白Vimentin），不表达上皮细胞标志物（如角蛋白Cytokeratin）；可用于干细胞培养支持，作为胚胎干细胞（ESCs）、诱导多能干细胞（iPSCs）的饲养层细胞，通过分泌LIF持干细胞的未分化状态与自我更新能力；体外研究模型，用于研究成纤细胞功能（如ECM合成、细胞迁移）、胚胎发育机制、纤化疾病（如肺纤化、肝纤化）的病理过程，以及药物对间质细胞的作用效果；细胞衰老研究，REFs随传代自然衰老的特性，可用于探索细胞衰老的分子机制（如端粒缩短、氧化应激影响）及抗衰老药物筛选；支持其他细胞培养，制备REFs条件培养基（培养REFs的上清液），为难以培养的细胞（如生殖细胞、神经细胞）提供生长所需的营养因子，或作为3D细胞培养的支架细胞构建类器官模型。不同种属的胚胎成纤细胞，在基础形态、贴壁生长特性、核心分泌功能及常规培养条件上高度致，但是存在种属差异性，如细胞体积大小、分泌因子效果、对干细胞支持能力、可传代次、药物敏感性等等，般优选大鼠胚胎成纤细胞作为饲养层，需要依据不同实验选择适配。

方法简介 实验室分离的兔胚胎成纤细胞采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的兔胚胎成纤细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 兔胚胎成纤细胞培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液： 0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。