兔心肌成纤细胞培养体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 兔心肌成纤细胞

组织来源 心脏组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 兔心肌成纤细胞分离自心脏组织；心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成，非心肌细胞占细胞总数量的约70%，其中约90%以上的非心肌细胞由心肌成纤细胞组成，在不同物种（如小鼠、大鼠和人类）中可能略有差异。“成纤细胞" 指类存在于间质中的异质性高迁移基质细胞，其功能和表型具有组织特异性。在心脏中，心脏成纤细胞负责持组织稳态并调控细胞外基质（ECM）的更新。目前尚无特异性的心脏成纤细胞分子标志物，但这类细胞通常表达转录因子 21（TCF21）、波形蛋白（vimentin）及 CD90（或 Thy-1）。心肌成纤细胞在生物学特性上与肝星状细胞存在显著共性，二者均以“静息-激活"的功能状态转换为核心特征，且状态转换紧密关联细胞的增殖活性与功能实现。当受到应激或损伤时，成纤细胞会失去正常表型并活化成为肌成纤细胞。静息心肌成纤细胞的细胞骨架中不含 α- 平滑肌肌动蛋白（α-SMA）。与静息成纤细胞不同，肌成纤细胞收缩能力强，其细胞骨架排列特殊，含有α-SMA阳性应力纤 、成熟黏着斑，并会增加骨膜蛋白（periostin）和纤状胶原蛋白的合成。有研究表明，在模拟天然组织特性的弹性表面培养原代成纤细胞有助于减轻肌成纤细胞的活化。对于心肌组织而言，弹性模量（E）约为7 kPa的培养表面模拟健康组织，而E>10 kPa的表面则被视为纤化组织。这构成了个显著挑战，因为传统聚苯乙烯组织培养板的硬度要高得多，通常可达E=3 GPa。此外，虽然传代原代细胞以提高培养群体均性是常规操作，但传代会进步驱动肌成纤细胞活化。原代心肌成纤细胞在传统细胞培养中接种数小时内就会自发呈现促纤化的活化肌成纤细胞表型。有研究表明，在低营养、低血清、细胞接种在低生物力学刺激的弹性基质（而非坚硬塑料）上，可使未传代（P0）原代心肌成纤细胞在体外持超过72小时，且不会显著活化肌成纤细胞表型，但其持效果仍然有限。实验室分离的心肌成纤细胞，经实验测试，刚分离后即立刻接种在培养板/爬片，培养24 h约70-90%占比细胞表达Vimentin处于静息态（其他处于激活态），培养48 h约>70%转变为激活态，α-SMA表达上升。传代操作后大部分处于激活态。该细胞鉴定为接种24 h内静息态时刻鉴定（Vimentin/α-SMA），细胞经培养、运输后已处于激活态。

方法简介 实验室分离的兔心肌成纤细胞采用胶原酶-联合消化结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的兔心肌成纤细胞经Vimentin/α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 兔心肌成纤细胞 培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液： 0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。