兔真皮成纤细胞规格体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

商品属性：

产品信息：

产品名称 兔真皮成纤细胞

组织来源 皮肤组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 兔真皮成纤细胞分离自真皮组织；皮肤组织来源包括头部、脸部、手、脚、腿、背部、腹部、包皮等体表部位皮肤，可依据需求选用；真皮，位于表皮深层，向下与皮下组织相连，真皮结缔组织的胶原纤和弹性纤互相交织在起，埋于基质内。其内分布着各种结缔组织细胞和大量的胶原纤弹性纤，使皮肤既有弹性，又有韧性。其由两层组成——乳头层与网状层。真皮的结构组成是胶原蛋白、弹性纤以及基质。成纤细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在定条件下，它可以实现跟纤细胞的互相转化；成纤细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的真皮成纤细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30 min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6 h后细胞基本贴壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。真皮成纤细胞在生理条件下的主要功能包括：构造和持组织的正常形态，合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介 实验室分离的兔真皮成纤细胞采用先消化、后-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的兔真皮成纤细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 兔真皮成纤细胞培养基(基础培养基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传5代左右；3代以内状态佳

消化液： 0.25%

原代细胞培养步骤：

取材与预处理‌：取新生24小时内Wistar大鼠，麻醉后无菌取出肺组织，PBS冲洗去除血管和气管‌。

‌消化‌：剪碎肺组织，依次用0.2%胶原酶（37℃震荡1h）和0.5%酶（消化30min）消化，终止后过滤‌。

‌纯化‌：采用IgG吸附法去除未贴壁细胞，离心后重悬接种‌。

‌培养‌：使用含10%胎牛血清的DMEM培养基，37℃、5% CO₂培养，24小时后换液‌。

培养方法‌：

原代细胞培养‌

‌材料‌：新生大鼠肺组织、0.2%胶原酶、0.5%酶、DMEM培养基（含10%胎牛血清）。

‌步骤‌：

取出肺组织，PBS冲洗去除血管和气管，剪碎。

依次用胶原酶（37℃震荡1h）和酶（消化30min）消化，终止后过滤。

通过IgG吸附法去除未贴壁细胞，离心后接种于培养皿。

37℃、5% CO₂培养，24小时后换液。

‌注意事项‌：消化时间需严格控制（胎鼠25分钟，新生鼠40-60分钟），避免过度消化导致细胞死亡。

‌细胞系培养‌

‌传代‌：0.25%消化1-2分钟，加入含血清培养基终止，按1:2-1:4比例传代。

‌条件‌：DMEM+10%胎牛血清，每周换液2-3次，37℃、5% CO₂培养。

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