小鼠睾丸支持细胞规格体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 小鼠睾丸支持细胞

组织来源 睾丸组织

产品规格 5×10^5Cells/T25

细胞简介 小鼠睾丸支持细胞分离自睾丸；睾丸支持细胞又称Sertoli细胞，在体内呈不规则的高锥体形，细胞基部附着在基膜上，顶部伸至曲精小管腔面。它是生精细胞的支架，为其提供必需的营养物质，能合成与分泌雄结合蛋白，为其提供高浓度的雄环境等，还具有构成血-睾屏障，形成睾丸内微环境，调节精子发生等功能。睾丸支持细胞是睾丸的主要组成细胞，能分泌多种生长因子和免疫抑制因子，不仅可为精子提供营养支持和免疫保护，也能对其他细胞，如胰岛和神经细胞提供营养支持，而且当其与胰岛或神经细胞共移植时，也能够为这些细胞提供免疫保护，提高植活率。因此，睾丸支持细胞在细胞移植中具有广泛的应用前景。制备高活率的Sertoli不仅对Sertoli的基础研究有重要价值，而且在精子发生等领域有重要意义。

方法简介 实验室分离的小鼠睾丸支持细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的小鼠睾丸支持细胞经Fas-L免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 小鼠睾丸支持细胞培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 成纤细胞样

传代比例： 1:2

传代特性： 可传3代左右

消化液： 0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。