小鼠精原干细胞培养体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的佳培养状态。

细胞简介：

产品名称 小鼠精原干细胞

简称 SSCs

组织来源 睾丸组织

产品规格 5×10^5cells/T25

细胞简介 小鼠精原干细胞分离自睾丸组织；睾丸是雄性生殖器官，也叫精巢，具体结构包括生精小管以及周围的结缔组织。生精小管也叫曲精小管、曲细精管，是睾丸上细长而弯曲的管道。精原干细胞是位于睾丸生精小管的生精上皮内的群生精干细胞，是成体内的定向干细胞。精原干细胞的些独特优势使其成为动物转基因的理想宿主细胞。精原干细胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多项生命活动的调节机制的深入研究，精子发生机理的进步阐明以及精原干细胞转染，异体、异种移植技术的实际应用，都迫切需要找到种可行的方法将其分离纯化，以期得到较高产量和纯度的有活力的精原细胞用于体外培养。在哺乳动睾丸内，精子发生时个受高度调控和持续的过程，精原干细胞（SSCs）方面进行自我更新持干细胞数量，另方面又不断执行分化成各级生精细胞直至后生成精子。精原干细胞定居在曲精细管上皮的基膜处，是哺乳动物精子发生的原始细胞，也是动物体内起能将遗传信息传递的干细胞。精原干细胞体外培养体系的建立，在生物学、医学、畜牧业生产及制备转基因动物等领域具有广阔的应用前景。精原干细胞（SSCs）是生精上皮近基底膜的群细胞，具有自我更新能力和多向分化潜能，是哺乳动物体内能将遗传信息传递给下代的成体干细胞。

方法简介 实验室分离的小鼠精原干细胞采用先机械吹打、后消化，结合Percoll密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×10⁵ cells/瓶。

质量检测 实验室分离的小鼠精原干细胞经c-kit免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

产品信息：

培养信息：

自备试剂： 0.25% 、PBS 、培养基

培养基： 小鼠精原干细胞 培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液次

生长特性： 贴壁

细胞形态： 梭形、圆形

传代比例： 1:2

传代特性： 可传1-2代

消化液： 0.25%

冻存步骤：

冻存前准备‌

确保细胞处于对数生长期，密度达80%-90%‌。

配制冻存液：推荐50%基础培养基+40%FBS+10%DMSO‌。

‌细胞处理‌

弃去培养上清，用PBS润洗1-2次‌。

加入消化后，用含血清的培养基终止消化。

‌冻存操作‌

离心（1000RPM，3-4分钟）后弃上清，用冻存液重悬细胞‌。

分装至冻存管（每管1mL，细胞数100-400万）‌。

4℃静置10分钟，-20℃ 2小时，-80℃过夜后转入液氮‌。

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操作实验步骤：

1. 原代细胞分离

‌组织获取‌：采用成年SD大鼠，快速取出海马或脊髓组织，置于低温人工脑脊液（0-4℃）中保存‌。

‌消化与离心‌：使用木瓜蛋白酶消化组织，通过Optiprep不连续梯度离心，收集组织细胞密集带‌。

‌细胞培养‌：将细胞悬液接种于含B27添加剂和碱性成纤维细胞生长因子2（FGF-2）的培养基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培养‌。

2. 细胞纯化

‌差速贴壁法‌：通过摇床分离（200r/min去除小胶质细胞，280r/min收集少突前体细胞）‌。

‌免疫磁珠分选‌：利用NG2抗体标记后通过磁珠分选，提高纯度‌。

3. 细胞传代与冻存

‌传代‌：使用含EDTA和DNase I的消化液处理细胞，按1:3比例传代‌。

‌冻存‌：将细胞重悬于冻存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降温后保存于液氮中‌。

4. 功能验证

‌免疫荧光染色‌：检测NG2、GFAP等标志物表达，确认细胞纯度‌。

‌电生理记录‌：通过膜片钳技术检测细胞电特性（如钠电流）。