植物细胞质壁分离技术分析

(1)原代细胞质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。液泡中的胞液具有一定的溶质势(或称渗透势)，而活的原生质特别是液泡膜和质膜则具有半透性。所以，当细胞与外界溶液接触时，便与外液构成渗透系统，并可能发生水分的移动。若外液的水势低于胞液的溶质势，则水分外渗的结果可使原生质随着液泡一起收缩而脱离细胞壁，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而是质壁分离复原。

原代细胞实验步骤

1、 试剂的配置：

① 台盼蓝：4%台盼蓝母液：称取4g台盼蓝，加少量蒸馏水研磨，加双蒸水至100ml，用滤纸过滤，4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。

② 中性红：先配成1%中性红水溶液(1克中性红溶于100毫升蒸馏水中)。取这种溶液1毫升，用0.6%生理盐水(或蒸馏水)稀释到50毫升，即成0.02%中性红水溶液，贮存在棕色瓶里，放在黑暗处。

③ 美蓝：取0.5克美蓝，溶于30毫升95%酒精中，加100毫升0.01%氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内。此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。

④ 甲基蓝：取1克甲基蓝，溶于29毫升70%酒精中，加入70毫升蒸馏水，即成1%甲基蓝染液。

2、 染色操作步骤：略

3、 细胞活力测定：染色过的细胞材料，放在显微镜下观察。凡未染或染色及浅的细胞是有活力的，而染色深的细胞是无活力的死细胞。

4、 按公式计算出细胞活力。 细胞活力(%)=未染色的细胞数/观察的细胞总数 X 100%

原代细胞注意事项

1. 台盼蓝对人体有毒

2. 对细胞进行染色时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。