细胞电穿孔转染操作步骤

原代细胞对于细胞转染而言，目前主要是转染试剂(多为脂质体)的天下。磷酸钙转染的方法虽说有些out，但有些细胞还就认准这一套。不过，对于某些淋巴细胞而言，化学方法怎么都不奏效，那我们只能采取强硬手段，用电穿孔的方法进行转染。

应用电穿孔时，一般都选择恒定的电容，然后在不同的场强下轰击细胞，以摸索*实验条件。就大多数细胞而言，在电穿孔后能有20-50%的细胞存活率就OK，足以保证DNA的成功转染。电穿孔通常在室温下进行，之后将细胞置于冰上，以延长原代细胞膜孔道开放的时间。

与传统的磷酸钙和脂质体转染相比，电穿孔具有操作简便、转染效率高等诸多优点。但它也受多种因素的影响。电压太低时，细胞膜的改变不足以允许DNA分子通过，而电压过高时又会造成细胞的损伤。这也就是常说的对细胞毒性大。因此转染时所需的细胞要比其他方法更多。同时，转染时所需的DNA也更多。如果想要稳定转染的话，将DNA线性化后可能效果更好，因为线性DNA更容易整合到基因组DNA上。其他条件如缓冲液、转染温度等也会对转染效果产生影响。

由于贴壁细胞必须附着在培养瓶的表面才能生长，因此悬浮细胞更易通过电穿孔方法进行转染。不过，不同细胞间的*转染参数变异较大，需要不断摸索。如果有优化好的转染步骤用来参考，那就不过了。

Bio-Rad公司zui近就新发布了12种原代细胞和细胞系的电穿孔步骤，帮你节省了优化的时间。这些细胞包括T细胞、嗜中性粒细胞和几种B细胞淋巴瘤。除了这12种细胞，数据库中还包括了很多常用细胞系如293、3T3、CHO的电穿孔步骤。这些步骤包括了优化过的电压、电容、细胞密度、电转缓冲液等，是在Bio-Rad 公司Gene Pulser Mxcell电穿孔系统和Gene Pulser缓冲液的基础上进行开发的。