原代细胞线粒体膜势能的检测

原代细胞线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡，而线粒体跨膜电位的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中zui早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。

线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester(TMRM)等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。

方法：将正常培养的原代细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123(1mM)或终浓度为DiOC6(25nM)，JC-1(1mM)，TMRM(100nM)，37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。

注意事项

1. 始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。

2. 与染料达到平衡的原代细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料结合，降低染料的浓度，引起假去极化。