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TECHNICAL ARTICLES肿瘤细胞很多化合物都可以作为冻存保护剂,它们既可以单独使用也可以联合使用,例如糖、血清和去污剂。虽然冻存没有的准则,但是大家普遍认为二甲基亚砜(DMSO)和甘油是保护活细胞和组织使用zui广泛且zui有效的冻存保护剂。其他冻存保护剂可根据情况使用,可单独使用也可联合使用,包括:聚乙烯乙二醇(polyethylene glycol),丙烯乙二醇(propylene glycol),甘油(glycerine),聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrolidone),山梨醇(sorbitol),右旋糖苷(dextran),海藻糖(trehalose)。
冻存组织和整个器官的需求,促进了冻存方法的发展,新方法也提高了冻存肿瘤细胞和有机体的复苏。这些方法包括改变冻存保护剂的浓度和加入添加剂,避免冻存过程引发的细胞调亡或 程序性死亡。多年来人们一直认为,是冻存过程中产生的细胞内物理变化或损坏,造成冻存后细胞的死亡。而zui近有研究发现,一些更为精细的胞内活动可能导致了细胞死亡,而这些活动可在一定程度上受控于适当的冻存添加剂。
冻存过程中,冻存保护剂有多种功能。例如,DMSO 可以降低冰点,促进细胞在胞内冰晶形成之前脱水更加*。普遍认为,当冻存保护剂可有效穿透细胞,延迟胞内冰晶形成,降低溶液效应时,冻存保护的效果*。另外,需要根据冻存的细胞类型来选择冻存保护剂。对绝大多数细胞来说,甘油是更好的选择,因为它的毒性比DMSO 小。但是,DMSO 具有更好的渗透性, 通常作为较大型较复杂的细胞冻存,如原生生物。在添加到细胞悬液之前,冻存保护剂应该用新鲜培养基稀释到适宜浓度,这能zui小化潜在的化学反应损害,并确保肿瘤细胞能均一接触到保护剂,减少毒害效应。DMSO 和甘油通常使用的浓度范围为 5-10%(v/ v)。除了用于植物细胞,二者一般不联合使用。
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