如何确保肿瘤细胞实验成功？

1.肿瘤细胞目标长度为18–30个核苷酸。

2.尝试将熔解温度限制在55至65˚C，温度相差小于5˚C。

3.如果引物的Tm值较低，则寻找G和C含量更高的序列，或者稍微延长引物的长度。

4.GC的目标含量为40-60%，3’端的C或G可促进结合。

5.一般在引物的5’限制性位点处添加3-4个核苷酸，以实现切割。

6.避免二级结构区，富含GC和富含AT的结构域应分布均衡。

7.避开连续四个或更多的同一碱基重复或二核苷酸重复。

8.避免引物之间的互补（引物内有超过三个碱基互补）或引物内部形成互补（正向和反向引物具有互补序列）。

9.如果您将引物用于克隆，我们推荐采用卡套柱纯化，以达到zui低纯度水平。

10.如果您将肿瘤细胞引物用于突变实验，则在引物中间设计错配碱基。
 NCK衔接因子蛋白2IgG     细胞色素c氧化酶7A2    小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)
 Nemo样激酶IgG     细胞色素C氧化酶亚基3    小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)
 NFAM1IgG     细胞色素c氧化酶COX7A2    小鼠糖原合成酶激酶(GSK)
 NFkB诱导的激酶IgG     细胞色素C氧化酶亚基6B    小鼠糖皮质类固醇受体(GR)
 NF-κB活化激酶IgG     激活素受体2A    小鼠糖化血红蛋白A1c(GHbA1c)
 NK细胞表面抑制性受体CD94IgG     β-抑制蛋白1    小鼠糖蛋白130(gp130)
 NK细胞受体/自然杀伤细胞活化性受体IgG     磷酸化β抑制蛋白1    小鼠碳酸酐酶2(CA-2)
 NK细胞受体2A/自然杀伤细胞活化性受体2AIgG     β-抑制蛋白2    小鼠碳酸酐酶(CA)
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