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原代细胞 冻存及复苏

更新时间:2017-09-04点击次数:459

为了保存原代细胞,特别是不易获得的突变型细胞或细胞株,要将细胞冻存。冻存的温度一般用液氮的温度—-196℃,将细胞收集至冻存管中加入含保护剂(一般为二甲亚砜或甘油)的培养基,以一定的冷却速度冻存,zui终保存于液氮中。在极低的温度下,细胞保存的时间几乎是无限的。
复苏一般采用快融方法,即从液氮中取出冻存管后,立即放入37℃水中,使之在一分钟内迅速融解。然后将细胞转入培养器皿中进行培养。
冻存过程中保护剂的选用、细胞密度、降温速度及复苏时温度、融化速度等都对细胞活力有影响。
将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中的过程称为培养。如系组织块培养,则直接将组织块接入培养器皿底部,几个小时后组织块可贴牢在底部,再加入培养基。如系细胞培养,一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数,按要求以一定的量(以每毫升细胞数表示)接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后,立即放入培养箱中,使细胞尽早进入生长状态。
正在培养中的细胞应每隔一定时间观察一次,观察的内容包括细胞是否生长良好,形态是否正常,有无污染,培养基的PH是否太酸或太碱(由酚红指示剂指示),此外对培养温度和CO2浓度也要定时检查。
一般原代细胞培养进入培养后有一段潜伏期(数小时到数十天不等),在潜伏期细胞一般不分裂,但可贴壁和游走。过了潜伏期后细胞进入旺盛的分裂生长期。细胞长满瓶底后要进行传代培养,将一瓶中的细胞消化悬浮后分至两到三瓶继续培养。每传代一次称为“一代”。二倍体细胞一般只能传几十代,而转化细胞系或细胞株则可无限地传代下去。转化细胞可能具有恶性性质,也可能仅有不死性(Immortality)而无恶性。
IL11RA     Others    Canine    狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
IL1RL1     Others    Mouse    小鼠 IL1RL1 / ST2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
ANTXR2     Others    Mouse    小鼠 ANTXR2 / CMG2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
AMICA1     Others    Mouse    小鼠 AMICA1 / JAML 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
CD276     Others    Mouse    小鼠 B7-H3 / CD276 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
Spike     Others    SARS    SARS Spike S1 Subunit 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
HA     Others    H2N2    甲型流感 H2N2 (A/Guiyang/1/1957) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
原代细胞

 

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