原代细胞有丝分裂的实验方法

(一)原代细胞试验原理

    细胞有丝分裂指数(mitotic index，MI)是指属于分裂期的细胞占总细胞数的百分率．用于表示细胞增殖旺盛的程度，也可用于检测药物对细胞增殖能力的影响。用盖玻片培养法培养细胞，做固定和染色后，镜下观察和计数1000个细胞中处于分裂期的细胞数并计算MI。

(二)材料

1．待检材料(药物)。

2．细胞培养成层的贴壁细胞。

3．试剂 甲醇、3％吉姆萨染液。

4．器材CO2培养箱、倒置显微镜、盖玻片(2．2 cm×2．2 cm，需预先清洗和灭菌处理)、塑料培养皿(3．5 cm)、载玻片、封片用盖玻片、中性树胶。

(三)实验方法

1．将细胞消化成单个细胞悬液，将细胞悬液分瓶培养，分成不加药的对照组和加人不同剂量药物的实验组。

2．细胞传代培养的方法培养细胞，并制成浓度为105／ml的细胞悬液。

3．将清洗和灭菌处理的盖玻片放置在塑料培养皿中，将细胞悬液摇匀后接种于培养皿中，各皿中接种量相同。

4．分别于培养24 h、48ht和72h后从培养皿中取出盖玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。

5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆萨染液染色。晾干后用中性树胶封片。

6．油镜下或高倍镜下计数1000个细胞中处于分裂期的细胞数。

7．计算MI按下列公式计算MI。

(四)结果与分析

    将对照组和药物组的实验结果绘制成直方图并加以比较，也可绘制成MI曲线进行比较：

(五)注意事项

1．为了减少误差，实验者必须熟悉各期分裂象细胞的形态特征，该实验自始至终由一人完成，当两人以上观察时，应掌握相同的标准。

2．MI曲线与原代细胞生长曲线趋势基本相似，但不*相同。如果在细胞增长达饱和密壁并进入停止期后．细胞数量很多，而分裂象细胞可*消失。

3．细胞在盖玻片上的密度常不均匀，细胞密集区与区的分裂象细胞数目可能不同。计数时要选择密度近似区，以减少实验误差。
七甲基三硅氧烷标准品    1873-88-7    七甲基三硅氧烷标准品    Heptamethyl Trisiloxane    150mg
齐多夫定标准品    30516-87-1     齐多夫定标准品    Zidovudine     400mg
齐多夫定相关物质B标准品    25526-94-7     齐多夫定相关物质B标准品        25mg
齐多夫定相关物质C标准品    65-71-4     齐多夫定相关物质C标准品        100mg
齐拉西酮相关物质A标准品    87691-88-1     齐拉西酮相关物质A标准品        10mg
齐拉西酮相关物质C标准品        齐拉西酮相关物质C标准品        10mg
齐拉西酮相关物质D标准品        齐拉西酮相关物质D标准品        10mg
齐留通标准品    111406-87-2     齐留通标准品    Zileuton    150mg
齐留通相关物质A标准品        齐留通相关物质A标准品    Zileuton Related Compound A    50mg
齐留通相关物质B标准品        齐留通相关物质B标准品    Zileuton Related Compound B    50mg
原代细胞