肿瘤细胞转染实验小贴士

肿瘤细胞转染目前已经成为研究和控制真核细胞基因表达的重要手段。本文整理了一些关于转染实验前的准备工作及一些实验过程中的小贴士，希望这些信息能够帮助各位科研君们做好转染实验及提高实验效率。

① 从健康细胞开始
Ⅰ 转染实验前，细胞解冻后传代3–4次。 这使得细胞从解冻过程中恢复过来，并恢复正常的生长速度。
Ⅱ 仅使用活性 >90%的细胞——使用台盼蓝染色可轻松测定细胞活性。
Ⅲ 定期传代细胞，切勿让细胞长到汇合状态或过度生长。如果让细胞长到汇合状态，可能会改变细胞的生长速度以及形态。
a. 请在汇合率达到90%之前对细胞进行传代。我们建议您使用胰酶替代物Cellstripper™试剂(Corning 25-056-CI)使细胞脱壁。Cellstripper™试剂可于室温下存储在通风橱中。可通过添加过量的Cellstripper™来跳过PBS洗涤的步骤，然后吸弃全部液体，仅留可覆盖瓶子表面的液体。
* 非酶类细胞分离溶液，其配方是螯合剂的配方，可温和分离组织培养物的贴壁细胞。性质比胰酶更温和。
b. 传代条件取决于所用的细胞系。 部分经验法则：
对于快速生长的细胞，倍增时间为16小时(如HEK-293)，按1：10的比例分瓶。
对于生长缓慢的细胞，倍增时间为36小时(如原代细胞)，按1：5的比例分瓶。
Ⅳ 保留冻存的细胞系，并定期解冻新细胞。 传代次数高(>30–40)时，细胞的生长速度和形态会改变。

② 进行实验之前，请先规划您的实验。
务必要熟悉实验方案、确定所需的材料量，并在开始实验前确认所需的一切物品条件均已齐备。
Ⅰ 开始前，设计好铺板路线图，标注好每次处理或实验条件。
Ⅱ 计算所需脂质体和DNA的储备量，并确认有足够的下列材料：TransfectGRO减血清培养基(Corning 40-300-CVR)，Lipofectamine® 2000 或Lipofectamine® LTX试剂，以及DNA (0.5–1 µg/µL)。

③ 转染时，请使用DNA。
Ⅰ 使用无内毒素的试剂盒和实验方案制备DNA。
Ⅱ 通过测量OD 260/280值来确定DNA纯度，测得的OD值应介于1.7–1.9]之间。数值过高或过低均说明有杂质，肿瘤细胞不宜用于转染实验。
Ⅲ 在无DNA/RNA酶的水或TE中稀释DNA。
Ⅳ 制备的工作浓度为0.5–1 µg/µL。 可用SpeedVac®浓缩仪或透析过滤装置(例如，Millipore Amicon®超滤管)来浓缩DNA。
200mg    氨马尿酸标准品    61-78-9    Aminohippuric Acid    氨马尿酸标准品
200mg    氨鲁米特标准品    125-84-8    Aminoglutethimide    氨鲁米特标准品
200mg    氨甲环酸标准品    1197-18-8     Tranexamic Acid     氨甲环酸标准品
200mg    氨基己酸标准品    60-32-2    Aminocaproic Acid    氨基己酸标准品
200mg    氨苄青霉素三水酸标准品    7177-48-2    Ampicillin Trihydrate    氨苄青霉素三水酸标准品
200mg    氨苄青霉素标准品    69-53-4    Ampicillin    氨苄青霉素标准品
200mg    氨苯甲酸钠标准品    555-06-6    Aminobenzoate Sodium    氨苯甲酸钠标准品
200mg    氨苯甲酸钾标准品    138-84-1    Aminobenzoate Potassium    氨苯甲酸钾标准品
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