判断原代细胞活性是否正确工作的原理

原代细胞活性是判断体外培养细胞在某些条件下是否能正常生长的重要指标,如药物处理、放射性或紫外线照射、培养条件变化等。目前常用的方法有很多,如有台盼蓝染色法、克隆(集落)形成法、H放射性同位素掺入法、MTT法等。本文总结了一些常用的细胞活性检测方法的原理、特点，并对比了各自的优缺点。
一、染色计数法
1. 化学染色法
染色计数法是细胞培养中检查细胞死活zui常用的方法，直接利用死细胞和活细胞对染料的不同亲和力，检查细胞活性，能在光学显微镜下观察到染色结果。可分为两类：死细胞着色法和活细胞着色法。使死细胞着色的常用染料有台盼蓝、苯胺黑、伊红Y。能使活细胞着色的常用染料有结晶紫、亚甲基蓝、甲苯胺蓝等。其中zui常用的是台盼蓝染色法。细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA结合，使其着色，而活细胞能阻止染料进入细胞内，故可以鉴别死细胞与活细胞。通过细胞计数可得出细胞的存活率。

本染色法方便实用，价格低廉，操作简单。但是台盼蓝染色时，时间不宜过长，否则部分活细胞也会着色，会干扰计数。而且，细胞没有经过固定，形态不清晰。

2. 荧光染色法
一些荧光染料对死细胞和活细胞也有不同的作用效果，利用荧光显微镜检测细胞活性。如碘化丙啶（PI），被活细胞排斥但能穿透正在死亡或已经死亡细胞的细胞膜，因此活细胞不被染料上色，只有死细胞或凋亡细胞才能被染上红色。吖啶橙（AO）能透过质膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。溴乙锭（EB）仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。也可应用AO-EB双染法鉴定细胞死活。

原代细胞这种检测方法相比传统的染料，具有灵敏度高，操作简便，结果容易分辨等特点，而且利用双染法还可以分辨活细胞、凋亡早期细胞、凋亡晚期细胞、死亡细胞。在细胞凋亡的检测上有很广泛的应用。

缺点在于，要求特殊的仪器进行检测，如荧光显微镜、激光扫描共聚焦显微镜或流式细胞仪。而且通过荧光染料具有毒性，操作时需要带手套。
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原代细胞