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分享活肿瘤细胞表面受体配体结合检测的新技术

更新时间:2017-11-01点击次数:423

Tag-lite是SNAP-Tag与HTRF技术相结合,用来进行活肿瘤细胞表面受体分析的一种技术。

    SNAP和CLIP是小的融合标签蛋白,可特异地与底物通过苄甲基不可逆共价结合, 其底物分别为苄甲基鸟嘌呤(BG)和苄甲基胞嘧啶(BC)。由于底物可与各种染料形成衍生物,这样,通过共价反应,染料就标记到SANP或CLIP上了。

    SNAP或CLIP可以非常容易地融合到蛋白质的N端或C端,所以我们可以构建SNAP或CLIP与目标蛋白的表达载体。质粒转染、融合蛋白表达后,加入标记了荧光染料的底物,我们可以得到标记了荧光染料的目标蛋白。

    在Tag-lite技术中,用pSNAP或pCLIP与编码目标GPCR的基因构建质粒,转染入细胞后,就可表达N端融合了SNAP或CLIP的目标GPCR。

    底物(BG或BC)与HTRF荧光染料反应形成衍生物,例如与供体(Donor)铽穴状化合物(Lumi4®-Tb)形成衍生物,SANP-GPCR或CLIP-GPCR融合蛋白与其反应,则Tb被标记到GPCR上。加入受体(Acceptor)荧光染料标记的配体,肿瘤细胞可以进行受体配体结合实验。根据实验目的,HTRF的能量受体(Acceptor)与底物形成衍生物,则Acceptor被标记到GPCR上,可以进行GPCR同源二聚化实验。除此之外,我们还可以进行GPCR异源二聚化实验、寡聚化实验以及内源化实验等细胞表面受体分析。
盐酸氟奋乃静标准品    146-56-5     125mg    Fluphenazine Hydrochloride 
盐酸氟奋乃静庚酸酯标准品    3105-68-8     125mg    
盐酸氟西泮标准品    1172-18-5     200mg    Flurazepam Hydrochloride CIV
盐酸氟西汀标准品    56296-78-7     200mg    Fluoxetine Hydrochloride 
盐酸格拉司琼标准品    107007-99-8     150mg    Granisetron Hydrochloride 
盐酸胍法辛标准品    29110-48-3     125mg    Guanfacine Hydrochloride 
盐酸海克卡因标准品    532-76-3     1g    Hexylcaine Hydrochloride
盐酸环苯扎林标准品    6202-23-9    200mg    Cyclobenzaprine Hydrochloride
盐酸环丙沙星标准品    86393-32-0    400mg    Ciprofloxacin Hydrochloride
盐酸环喷托酯标准品    5870-29-1    300mg    Cyclopentolate Hydrochloride
盐酸黄连素标准品    633-65-8    50mg    Berberine Chloride
盐酸黄酮哌酯标准品    3717-88-2     200mg    Flavoxate Hydrochloride
肿瘤细胞

 

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