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定量PCR试剂盒
探针法荧光定量PCR试剂盒
50T皱褶青霉探针法荧光定量PCR试剂盒
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ARTICLES【产品名称】皱褶青霉探针法荧光定量PCR试剂盒
【英文名称】Penicillium rugulosum
【产品编号】YSP7066
【包装规格】50T
【预期用途】
产品仅用于科研本产品可用于肉及肉制品中鸭源性成分的定性检测,所用仪器为实时荧光PCR仪,可通过实时扩增曲线判断样品中是否存在鸭源性成分。
【检验原理】
本试剂盒采用实时荧光PCR技术,针对鸭源性成分核酸序列设计特异性引物和荧光探针,通过实时荧光一步法RT-PCR(Taqman探针法)对鸭源性成分核酸进行定性检测。
*的扩增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及优化的反应体系保证更高的扩增效率。以相同量的293T细胞cDNA为模板,扩增β-actin基因,与同类产品相比,UNICONTM qPCR Master Mix扩增信号更强,扩增效率更高。
PCR实验方法步骤:
皱褶青霉探针法荧光定量PCR试剂盒方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
3:结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 5 min | 1 |
变性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
实验步骤:
典型的PCR由
(1)高温变性模板;
(2)引物与模板退火;
(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
98%25g1g赤式2(4基2,6二基基)1(4羟基3基基)1醇57160471zonula occluden1
3-(N-乙酰-L-半胱氨-S-基)对乙酰氨基酚钠盐 质量规格:国进口 3-(N-Acetyl-L-cystein-S-yl) Acetaminophen Sodium Salt 人直肠粘膜上细胞*培养基100mL
Madecassoside蒿相关物质B标准品规格:规格:人精氨脱羧酶(ADC)ELISA试剂盒 0.2ml
MN(Human Mannose) ELISA Kit 人甘露糖CAS号:1026353207 还原型抗坏血检测试盒500mgHuman/人Elisa试盒3107344
98%25g5g醉椒素72962437Occludin
罗硝唑 质量规格:>98.5%,BR Ronidazole 化高铁血红蛋白参比液(4种×2套) /Cyanomethemoglobin reference solution10毫升×8支国产/进口
Asiatic acid青蒿琥酯标准品规格:规格:人轴抑制蛋白2(Axin-2)ELISA试剂盒 0.2ml
MR(Human mannose receptor) ELISA Kit 人甘露糖受体CAS号:102625649 谷胱甘肽过氧化物酶检测试盒100mgHuman/人Elisa试盒3635
3基7羟基香豆素5mg
辛硫标准溶液(100μg/ml,u=4%) 质量规格:100μg/ml,u=4% Phoxim solution
AQP2 (aquaporin Protein2) 水通道蛋白2(抗原)*抗精子抗体检测试盒25gHuman/人Elisa试盒496468
荧光素二钠盐5mg
补体成分2(C2)重组蛋白英文名称:Recombinant Complement Component 2 (C2)
ABCA1(ATP binding cassette transporter A1) 腺苷三结合盒转运体A1抗原进口、分装BMP结合内皮调节子检测试盒500gHuman/人Elisa试盒4964710
98%100g100ml胃蛋白酶(猪胃粘膜)Epigen
辛硫标准溶液(10μg/ml,u=6%) 质量规格:10μg/ml,u=6% Phoxim solution
ABCG1 peptide 三腺苷结合盒亚家族G1抗原进口、原装尿白蛋白检测试盒5gHuman/人Elisa试盒4964710
皱褶青霉探针法荧光定量PCR试剂盒远志皂苷B CAS号: 规格: HPLC≥98%;5mg 订购|咨询
藤黄 CAS号: 2752650 规格: HPLC≥95%;20mg 订购|咨询
构树碱A CAS号: 173220070 规格: HPLC≥98%;5mg 订购|咨询
11羟柳杉 CAS号: 88664088 规格: HPLC≥98%;5mg 订购|咨询
3β酰氧7,25甘遂二24 CAS号: 1352001092 规格: HPLC≥98%;5mg 订购|咨询
林泽兰内C CAS号: 规格: HPLC≥98%;5mg 订购|咨询
林泽兰内B CAS号: 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
蒲公英甾 CAS号: 6426433 规格: HPLC≥98%;10mg 订购|咨询
15羟松香 CAS号: 规格: HPLC≥98%;5mg 订购|咨询
金合欢素;刺槐素 CAS号: 480444 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
大黄8O葡萄糖苷 CAS号: 13241286 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
正酞;酞内 CAS号: 6066495 规格: HPLC≥98%;50mg 订购|咨询
澳洲茄;澳州茄 CAS号: 126170 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
扁蓄苷 CAS号: 572305 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
7表紫杉 CAS号: 105454044 规格: HPLC≥98%;20mg 订购|咨询
荧光定量PCR检测方法包括以下步骤:
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线;
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
产品仅用于科研其中步骤(1)为:将参照基因与待测目的基因片段等比例连接,克隆到同一个质粒载体上,构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品,并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因,较佳地管家基因,优选地为RPPH1的扩增区域,其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体,较佳地为PCR克隆载体,优选地为TA cloning载体,所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1:1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1,解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题,提高HER2基因扩增检测的可靠性。步骤(2)为:待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后,目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数,计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值,即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因,较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因,更佳地为HER2基因的扩增区域,所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法,所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增,更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
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