伪牛痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

实验过程：
一、伪牛痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒试剂准备
1. DNA模板
2．产品仅用于科研对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：
产品名称：伪牛痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒
英文名称：Pseudocowpox Virus(PCPV)
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
运输及保存
低温运输，-20℃保存，保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX（根据机型决定，具体见使用方法）。
本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

​
产品及特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒探针法荧光定量保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
以下是公司正在热销的产品：
97%100g1g去血根980712AntiThrombin Ⅲ

 小鼠关节软骨细胞*培养基100mL

S100钙结合蛋白A11(S100A11)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 PRKAR1A / PRKAR1 / PKR1 蛋白 (His 标签)*25000 mL/瓶

人BALPGRAMD3/NS3TP2  型肝炎病NS3反转录激活蛋白2抗体规格:96T/48T规格:10mgα防御素检测试盒20mg人胃癌细胞，AZ521细胞1x10^6cells

standard for GC,≥99.5%(GC)25g5g异樱花苷63968649antiendothelial cell antibody

泽泻醇A醋酯 质量规格：HPLC≥98%，标准品 Alisol A 24-acetate

S100钙结合蛋白B(S100B)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)重组人 GADD45G / CR6 蛋白*1000 mL/瓶

人I 型胶原C 端肽TNIK  TRAF2和NCK激酶相互作用蛋白抗体规格:96T/48T规格:200mgα辅肌动蛋白4检测试盒20mg人胃癌细胞，HGC27细胞1x10^6cells

Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）20mg

2-O-乙酰山椒子 订购|咨询 规格： HPLC≥98%;10mg ELISA Kit for Human Dual specificity protein phosphatase 4小鼠转录激活因子6(ATF6)ELISA试剂盒，英文名：ATF6 ELISA Kit

MMP2  基质金属蛋白酶2(多肽抗原)进口、分装可溶性细胞性T淋细胞相关抗原4检测试盒5gHuman/人Elisa试盒5006622

Super Fluor 680（效果同Alexa Fluor 680）20mg

曲匹地尔 订购|咨询 规格： 50mg 舞蹈症相关蛋白1抗体 FGF21 ELISA Kit 成纤维细胞生长因子21(FGF21)ELISA试剂盒

betaAmyloid(116) peptide (rat, mouse)   β淀粉样肽（116）（大鼠，小鼠）进口、原装醛固醇检测试盒1gHuman/人Elisa试盒5006622

98%5g5g透明质酶Cytochrome P450 2C19

氟乐灵标准溶液(10μg/ml,u=5%) 质量规格：10μg/ml,u=5%  Trifluralin solution 人胚肺成纤维细胞英文名称：KMB17

MMP3(matrix metalloproteinase3/Transin1/SL1/Stromelysin1 precursor)  基质金属蛋白酶3(抗原)现货供应UDP葡糖醛基转移酶1家族多肽A1检测试盒25gHuman/人Elisa试盒5006666
伪牛痘病毒探针法荧光定量PCR试剂盒达托1,1'Carbonyldipyrrolidine；Bis(tetram...25G通用试剂

达托(标准品)2?Chloro?4,5?dihydro?1,3?dimethyl...1G通用试剂

盐柔红6Chloro1hydroxibenzotriazol,99%500G通用试剂

盐柔红(标准品)2Chloro1methylpyridinium iodide,97%500G通用试剂

盐柔红(进口)4,5Dicyanoimidazole,99.0%5G通用试剂

地西他滨/ 5氮杂2'脱氧胞嘧啶核苷4Methoxycinnamic acid, predominantly ...5G通用试剂

地西他滨/ 5氮杂2'脱氧胞嘧啶核苷（标准品）4Methoxycinnamic acid,≥98.0%10G通用试剂

5氮杂2'脱氧胞嘧啶核苷Isobutyl 1,2dihydro2isobutoxy1qui...5G通用试剂

醋德舍瑞林2Morpholinoethyl isocyanide,≥98.0%10ML通用试剂

去氨加压素;去氨压素MSNT,98%250MG通用试剂

莫匹罗星,假单胞菌TEMPO,98%1G通用试剂

匹伐他汀叔丁酯Nonadecanoic acid,≥98%1G通用试剂

多紫杉无水/多西他赛Heptafluorobutyric acid,≥99.0%5ML通用试剂

多紫杉无水/多西他赛（标准品）Conophylline(HPLC,≥98%)5MG通用试剂

多紫杉三水合物Guajadial5MG通用试剂
使用方法：
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的DN段作为阳性对照。
2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号（浓度为1×10E4 拷贝/μL，10μL相当于1万拷贝）或第5号（浓度为1×10E5 拷贝/μL，10μL相当于10万拷贝）再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品，则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应（20 μL体系，在样品制备室进行）
10. 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分（本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好。